Protein A/G免疫沉淀磁珠試劑盒

商品介紹：

Protein A/G Matrix免疫沉淀磁珠及試劑盒系列產(chǎn)品是利用納米表面技術(shù)使Protein A/G高密度定向包被到超順磁性微球表面，與當(dāng)前國(guó)際免疫磁珠市場(chǎng)上同類(lèi)產(chǎn)品相比，該產(chǎn)品具有更多的抗體結(jié)合位點(diǎn)，磁珠使用量更少，非特異性結(jié)合率低，可便捷高效地進(jìn)行免疫沉淀實(shí)驗(yàn)。每毫升免疫沉淀磁珠結(jié)合Human IgG的能力可達(dá)到300 μg以上，單個(gè)沉淀反應(yīng)僅需25 μL磁珠即可完成檢測(cè)。微米級(jí)磁珠提供的超大比表面積，大幅縮短抗體與抗原吸附所需的平衡時(shí)間，15 min內(nèi)即可完成抗體吸附過(guò)程，30 min內(nèi)完成抗原沉淀操作。簡(jiǎn)短的操作時(shí)間避免長(zhǎng)時(shí)間操作造成目標(biāo)蛋白水解，保證了目標(biāo)蛋白的活性及蛋白復(fù)合物的完整性。

免疫沉淀磁珠試劑盒配有經(jīng)過(guò)優(yōu)化預(yù)制的緩沖液，為免疫沉淀實(shí)驗(yàn)提供了佳的反應(yīng)條件，增強(qiáng)了免疫沉淀實(shí)驗(yàn)的穩(wěn)定性。

本產(chǎn)品可廣泛應(yīng)用于細(xì)胞裂解物、細(xì)胞分泌上清、血清、腹水等樣品中抗原的免疫沉淀反應(yīng)。操作者可以參考本操作說(shuō)明書(shū)，附表1的數(shù)據(jù)了解不同種屬來(lái)源及亞型的抗體與Protein A磁珠、Protein A/G的結(jié)合能力。

儲(chǔ)存條件：2～8℃保存

保存期：1年

注：磁珠結(jié)合Human IgG能力(Antibody Capacity)分別為：Protein A：0.4～0.5 mg/mL; Protein A/G：0.5～0.6 mg/mL

商品屬性：

操作流程：

1. 抗原樣品制備：本操作說(shuō)明書(shū)提供以下四種樣品處理方法，建議您根據(jù)不同來(lái)源的抗原樣品選擇適當(dāng)?shù)姆绞竭M(jìn)行預(yù)處理，使待檢測(cè)抗原釋放至樣品溶液中。

血清樣品處理：若目標(biāo)蛋白豐度較高，建議用結(jié)合緩沖液(②)稀釋血清樣品至目標(biāo)蛋白終濃度為10～100 μg/mL，置于冰上備用(或置于-20℃長(zhǎng)期保存)。

懸浮細(xì)胞樣品處理：離心收集細(xì)胞(4℃，500 g，10 min)，棄上清后稱(chēng)重，按每毫克細(xì)胞50 μL的比例用1× PBS(③)洗滌2次；按每毫克細(xì)胞5～10 μL 的比例加入結(jié)合緩沖液(②)，同時(shí)加入蛋白酶抑制劑(如終濃度為1 mM 的PMSF)，混勻后置于冰上處理10 min；離心收集上清液(4℃,14000 g,10 min)，置于冰上備用(或置于-20℃長(zhǎng)期保存)。

貼壁細(xì)胞樣品處理：移去培養(yǎng)基，按每1.0×105個(gè)細(xì)胞150 μL的比例用1×PBS(③)洗滌兩次；用細(xì)胞刮棒刮脫細(xì)胞，收集至1.5 mL EP管內(nèi)，按每1.0×105個(gè)細(xì)胞20～30 μL 的比例加入結(jié)合緩沖液(②)，同時(shí)加入蛋白酶抑制劑(如終濃度為1 mM的PMSF)，混勻后置于冰上處理10 min；離心收集上清液(4℃，14000 g，10 min)，置于冰上備用(或置于-20℃長(zhǎng)期保存)。

大腸桿菌樣品處理：離心收集大腸桿菌(4℃，12000 g，2 min)，棄上清后稱(chēng)重，按每克(濕重)菌體 10 mL的比例用1×PBS(③)洗滌2次；按每克(濕重)菌體5～10 mL的比例加入結(jié)合緩沖液(②)，同時(shí)加入蛋白酶抑制劑(如終濃度為1 mM 的PMSF)，重懸菌體，超聲裂解細(xì)胞，離心收集上清(4℃，17000 g，10 min)。

2. 磁珠預(yù)處理：將免疫沉淀磁珠(①)漩渦振蕩1 min，使磁珠充分振蕩重懸；取25～50 μL磁珠懸液置 于1.5 mL EP管中。加入200 μL 結(jié)合緩沖液(②)洗滌，進(jìn)行磁性分離［將EP管放置于磁性分離器(⑦)上，使磁珠被吸附在管壁至溶液澄清；該操作描述以下省略］，棄上清液，從磁性分離器上取下EP管，重復(fù)洗滌一次。后加入200 μL 結(jié)合緩沖液(②)重懸磁珠以備用。

步驟和注意事項(xiàng)：?

準(zhǔn)備實(shí)驗(yàn)環(huán)境：?確保實(shí)驗(yàn)區(qū)域清潔，?使用酒精清潔計(jì)數(shù)板和蓋玻片，?然后用吸水紙輕輕擦干。?

細(xì)胞培養(yǎng)：?

準(zhǔn)備試管或培養(yǎng)皿、?細(xì)胞培養(yǎng)基和待培養(yǎng)的細(xì)胞。?

取出保存于低溫下的細(xì)胞苗，?并加入培養(yǎng)基中，?搖晃混合均勻。?

用移液管將細(xì)胞培養(yǎng)基和細(xì)胞種植在試管或培養(yǎng)皿中。?

將試管或培養(yǎng)皿放置于恒溫培養(yǎng)箱中，?定期更換培養(yǎng)液。?

細(xì)胞凍存與復(fù)蘇：?

細(xì)胞系的凍存是將生長(zhǎng)較好的傳代細(xì)胞懸浮在加有冷凍保護(hù)劑的溶液中，?以一定的冷凍速率降至零下某一溫度，?并在此溫度下對(duì)其長(zhǎng)期保存的過(guò)程。?

復(fù)蘇則是將凍存的細(xì)胞系恢復(fù)到常溫的過(guò)程，?原則是“慢凍快融"，?以較大限度地保存細(xì)胞活力。?

細(xì)胞計(jì)數(shù)：?

制備細(xì)胞懸液，?使用消化單層培養(yǎng)細(xì)胞或收集懸浮培養(yǎng)細(xì)胞，?制成單個(gè)細(xì)胞懸液。?

在顯微鏡下，?用10×物鏡觀察計(jì)數(shù)板四角大方格中的細(xì)胞數(shù)，?細(xì)胞壓中線時(shí)，?只計(jì)左側(cè)和上方者，?不計(jì)右側(cè)和下方者。?

熒光顯微鏡使用：?

使用熒光染料對(duì)細(xì)胞進(jìn)行染色，?并觀察細(xì)胞所發(fā)出的熒光信號(hào)，?以研究細(xì)胞結(jié)構(gòu)和功能。?

聚合酶鏈反應(yīng)（?PCR）?：?

準(zhǔn)備PCR反應(yīng)所需的DNA模板、?引物、?聚合酶和核苷酸。?

按照PCR反應(yīng)液配制表制備反應(yīng)液。?

在反應(yīng)器中加入反應(yīng)液，?開(kāi)始PCR反應(yīng)。?

PCR反應(yīng)的成功與否，?可以通過(guò)電泳、?測(cè)序等方法進(jìn)一步確認(rèn)。?

轉(zhuǎn)染：?

準(zhǔn)備轉(zhuǎn)染所需的載體DNA和細(xì)胞。?

制備轉(zhuǎn)染試劑，?將DNA載體溶解于轉(zhuǎn)染試劑中，?與細(xì)胞混合均勻。?

處理轉(zhuǎn)染細(xì)胞，?并進(jìn)行下一步實(shí)驗(yàn)。?

在操作過(guò)程中，?應(yīng)注意實(shí)驗(yàn)室安全規(guī)范，?避免隨意丟棄垃圾，?及時(shí)登記購(gòu)買(mǎi)耗材或試劑，?保持實(shí)驗(yàn)環(huán)境的清潔和安全

下列是公司正在出售的產(chǎn)品：