二乙酸熒光素(FDA)免疫檢測

商品屬性：

商品介紹：

產(chǎn)品性狀：白色固體粉末

產(chǎn)品保存：避光-20℃保存，一年有效

產(chǎn)品說明：

二乙酸熒光素(Fluorescein Diacetate,FDA)是一種常用的培養(yǎng)動植物細(xì)胞以及植物細(xì)胞原生質(zhì)體的生活力鑒定染料，其染色機(jī)理也利用了死活細(xì)胞在代謝上的差異：FDA本身不產(chǎn)生熒光，也無極性，能自由滲透出入完整的細(xì)胞膜。當(dāng) FDA 進(jìn)入活細(xì)胞后，被細(xì)胞內(nèi)的脂酶分解，生成有極性的、能產(chǎn)生熒光的物質(zhì)——熒光素，該物質(zhì)不能自由透過活的細(xì)胞膜，積累在細(xì)胞膜內(nèi)，因而使有活力的細(xì)胞產(chǎn)生綠色熒光；而無活力的細(xì)胞因不能使 FDA 分解，而無法產(chǎn)生熒光。FDA 也可用于流式細(xì)胞儀。熒光素的激發(fā)和發(fā)射波長分別是 488nm和 530nm。

使用方法：

(1)配制溶液：將 FDA 溶于酮中，配成濃度為5 mg./ml的溶液，置于 4℃冰箱中保存。染色時將 FDA 加入到細(xì)胞液中，使其終濃度為100μg/ml。

(2)活細(xì)胞染色：取處于對數(shù)增長期的細(xì)胞液，離心濃縮，生理鹽水清洗1次，加入 FDA，在室溫黑暗處放置 5 min 染色；染色后離心，生理鹽水清洗1-2次，后用蒸餾水懸浮細(xì)胞，涂片觀察。

(3)死亡細(xì)胞胞染色：取魯哥氏溶液固定的死亡細(xì)胞按活細(xì)胞相同的方法進(jìn)行染色。

(4)觀察：用熒光顯微鏡觀察和拍照(明場和熒光分別拍照，物鏡使用 20×)?；罴?xì)胞被 FDA 染成亮綠色，當(dāng)細(xì)胞膜受損，熒光素?zé)o法在細(xì)胞內(nèi)累積，而使細(xì)胞無法發(fā)出熒光?；钚愿叩募?xì)胞發(fā)出強(qiáng)烈的綠色熒光，活性弱或死亡的細(xì)胞發(fā)光較弱或不發(fā)光。

注意事項：

(1)使用方法可依據(jù)細(xì)胞的具體情況適當(dāng)調(diào)整。

(2)魯哥氏即 Lugol’s 溶液，也就是碘液。取 6 克碘鉀溶于 20 毫升蒸餾水中，攪拌到溶解后，加入 4 克碘，等碘充分溶解，再加入 80 毫升蒸餾水，貯存在棕色試劑瓶內(nèi)。

步驟和注意事項：?

準(zhǔn)備實驗環(huán)境：?確保實驗區(qū)域清潔，?使用酒精清潔計數(shù)板和蓋玻片，?然后用吸水紙輕輕擦干。?

細(xì)胞培養(yǎng)：?

準(zhǔn)備試管或培養(yǎng)皿、?細(xì)胞培養(yǎng)基和待培養(yǎng)的細(xì)胞。?

取出保存于低溫下的細(xì)胞苗，?并加入培養(yǎng)基中，?搖晃混合均勻。?

用移液管將細(xì)胞培養(yǎng)基和細(xì)胞種植在試管或培養(yǎng)皿中。?

將試管或培養(yǎng)皿放置于恒溫培養(yǎng)箱中，?定期更換培養(yǎng)液。?

細(xì)胞凍存與復(fù)蘇：?

細(xì)胞系的凍存是將生長較好的傳代細(xì)胞懸浮在加有冷凍保護(hù)劑的溶液中，?以一定的冷凍速率降至零下某一溫度，?并在此溫度下對其長期保存的過程。?

復(fù)蘇則是將凍存的細(xì)胞系恢復(fù)到常溫的過程，?原則是“慢凍快融"，?以較大限度地保存細(xì)胞活力。?

細(xì)胞計數(shù)：?

制備細(xì)胞懸液，?使用消化單層培養(yǎng)細(xì)胞或收集懸浮培養(yǎng)細(xì)胞，?制成單個細(xì)胞懸液。?

在顯微鏡下，?用10×物鏡觀察計數(shù)板四角大方格中的細(xì)胞數(shù)，?細(xì)胞壓中線時，?只計左側(cè)和上方者，?不計右側(cè)和下方者。?

熒光顯微鏡使用：?

使用熒光染料對細(xì)胞進(jìn)行染色，?并觀察細(xì)胞所發(fā)出的熒光信號，?以研究細(xì)胞結(jié)構(gòu)和功能。?

聚合酶鏈反應(yīng)（?PCR）?：?

準(zhǔn)備PCR反應(yīng)所需的DNA模板、?引物、?聚合酶和核苷酸。?

按照PCR反應(yīng)液配制表制備反應(yīng)液。?

在反應(yīng)器中加入反應(yīng)液，?開始PCR反應(yīng)。?

PCR反應(yīng)的成功與否，?可以通過電泳、?測序等方法進(jìn)一步確認(rèn)。?

轉(zhuǎn)染：?

準(zhǔn)備轉(zhuǎn)染所需的載體DNA和細(xì)胞。?

制備轉(zhuǎn)染試劑，?將DNA載體溶解于轉(zhuǎn)染試劑中，?與細(xì)胞混合均勻。?

處理轉(zhuǎn)染細(xì)胞，?并進(jìn)行下一步實驗。?

在操作過程中，?應(yīng)注意實驗室安全規(guī)范，?避免隨意丟棄垃圾，?及時登記購買耗材或試劑，?保持實驗環(huán)境的清潔和安全

下列是公司正在出售的產(chǎn)品：