ECM Kit(小鼠IgM)免疫檢測

商品介紹：

用途：適于一抗為小鼠 IgM的Western Blotting 檢測。

商品屬性：

保存條件：4℃可保存一年 。

Western Blotting 檢測試劑盒內(nèi)容：

1.封閉試劑：10g 蛋白質(zhì)干粉(脫脂奶粉)。

2.HRP 標(biāo)記羊抗小鼠 IgM：親和純化抗體，經(jīng)過人血清吸附以去除交叉抗體。效價 1：2000-10000。

3.ECM 顯色劑：總量 100ml。含 A 液 5ml(×20倍)；B 液 5ml(×20倍)。每個試劑盒足夠 10 張小膜或800 c ㎡面積的膜顯色

工作原理：

蛋白質(zhì)的電泳分離是重要的生物化學(xué)分離純化技術(shù)之一,電泳是指帶電粒子在電場作用下 ,向著與其電荷相反的電極移動的現(xiàn)象。根據(jù)所采用的支持物不同,可分為：瓊脂糖凝膠電

泳、淀粉凝膠電泳、聚丙烯凝膠電泳等。其中以聚丙烯凝膠電泳(PAGE)廣泛。它的優(yōu)點為：無電滲作用,樣品用量少(1-100μg),分辨率高,可檢出 10-9-10-12mol的樣品,凝膠機械強度大,重復(fù)性好以及可以通過調(diào)節(jié)單體濃度或單體與交聯(lián)劑的比例而得到孔徑不同的凝膠。

SDS-PAGE 是的定性分析蛋白質(zhì)的電泳方式,它根據(jù)蛋白分子大小不同，遷移速率的不同而達到分離目的，特別是用于蛋白質(zhì)純度檢測和測定蛋白質(zhì)分子量。

免疫印跡是將凝膠電泳的高分辨力和免疫化學(xué)檢測的特異性融為一體。免疫印跡技術(shù)首先借助凝膠電泳將蛋白質(zhì)抗原分離，然后將凝膠中的蛋白質(zhì)轉(zhuǎn)印到膜上使之成為被分離的一個拷貝。免疫印跡為檢測樣品中是否存在蛋白的抗原提供一種可靠的方法，該法鑒定蛋白質(zhì)的原理是根據(jù)被測蛋白能與特異性抗體結(jié)合的特性并通過相對遷移率來體現(xiàn)該蛋白的分子量。

如果想要了解樣品中是否存在某一抗原，以及該抗原的含量或該抗原多肽鏈的相對分子質(zhì)量以及亞型，是否與其他蛋白結(jié)合，蛋白質(zhì)的酪氨殘基是否發(fā)生磷酸化等有關(guān)問題均可采用免疫印跡。

免疫印跡包括多個簡單步驟，可在一到兩天完成，該方法具有高效，簡便，靈敏等特點。

實驗操作步驟：

步驟和注意事項：?

準(zhǔn)備實驗環(huán)境：?確保實驗區(qū)域清潔，?使用酒精清潔計數(shù)板和蓋玻片，?然后用吸水紙輕輕擦干。?

細(xì)胞培養(yǎng)：?

準(zhǔn)備試管或培養(yǎng)皿、?細(xì)胞培養(yǎng)基和待培養(yǎng)的細(xì)胞。?

取出保存于低溫下的細(xì)胞苗，?并加入培養(yǎng)基中，?搖晃混合均勻。?

用移液管將細(xì)胞培養(yǎng)基和細(xì)胞種植在試管或培養(yǎng)皿中。?

將試管或培養(yǎng)皿放置于恒溫培養(yǎng)箱中，?定期更換培養(yǎng)液。?

細(xì)胞凍存與復(fù)蘇：?

細(xì)胞系的凍存是將生長較好的傳代細(xì)胞懸浮在加有冷凍保護劑的溶液中，?以一定的冷凍速率降至零下某一溫度，?并在此溫度下對其長期保存的過程。?

復(fù)蘇則是將凍存的細(xì)胞系恢復(fù)到常溫的過程，?原則是“慢凍快融"，?以較大限度地保存細(xì)胞活力。?

細(xì)胞計數(shù)：?

制備細(xì)胞懸液，?使用消化單層培養(yǎng)細(xì)胞或收集懸浮培養(yǎng)細(xì)胞，?制成單個細(xì)胞懸液。?

在顯微鏡下，?用10×物鏡觀察計數(shù)板四角大方格中的細(xì)胞數(shù)，?細(xì)胞壓中線時，?只計左側(cè)和上方者，?不計右側(cè)和下方者。?

熒光顯微鏡使用：?

使用熒光染料對細(xì)胞進行染色，?并觀察細(xì)胞所發(fā)出的熒光信號，?以研究細(xì)胞結(jié)構(gòu)和功能。?

聚合酶鏈反應(yīng)（?PCR）?：?

準(zhǔn)備PCR反應(yīng)所需的DNA模板、?引物、?聚合酶和核苷酸。?

按照PCR反應(yīng)液配制表制備反應(yīng)液。?

在反應(yīng)器中加入反應(yīng)液，?開始PCR反應(yīng)。?

PCR反應(yīng)的成功與否，?可以通過電泳、?測序等方法進一步確認(rèn)。?

轉(zhuǎn)染：?

準(zhǔn)備轉(zhuǎn)染所需的載體DNA和細(xì)胞。?

制備轉(zhuǎn)染試劑，?將DNA載體溶解于轉(zhuǎn)染試劑中，?與細(xì)胞混合均勻。?

處理轉(zhuǎn)染細(xì)胞，?并進行下一步實驗。?

在操作過程中，?應(yīng)注意實驗室安全規(guī)范，?避免隨意丟棄垃圾，?及時登記購買耗材或試劑，?保持實驗環(huán)境的清潔和安全

下列是公司正在出售的產(chǎn)品：