PKH67/PI雙染細(xì)胞凋亡與增殖毒性檢測(cè)試劑盒

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PKH67/PI 雙染細(xì)胞毒性檢測(cè)試劑盒是利用細(xì)胞熒光染料PKH67和PI對(duì)細(xì)胞進(jìn)行染色，利用PKH67標(biāo)記靶細(xì)胞，PI標(biāo)記死的靶細(xì)胞來(lái)區(qū)分不同的細(xì)胞，活的靶細(xì)胞成綠色，死的靶細(xì)胞成紅色和綠色，從而檢測(cè)細(xì)胞毒性作用。

根據(jù)不同的實(shí)驗(yàn)方案設(shè)計(jì)，可以用來(lái)檢測(cè)化合物的細(xì)胞毒性作用。也可以用來(lái)檢測(cè)殺傷性T 細(xì)胞或NK 細(xì)胞介導(dǎo)的細(xì)胞毒作用。

熒光染料PKH67是一種可對(duì)活細(xì)胞進(jìn)行熒光標(biāo)記的新型染料，可以標(biāo)記活體細(xì)胞，通過(guò)與膜結(jié)構(gòu)的脂質(zhì)分子結(jié)合而標(biāo)記細(xì)胞。對(duì)細(xì)胞毒性較小，熒光背景低，脂溶性高，能夠輕易穿透細(xì)胞膜，有著強(qiáng)而穩(wěn)定的綠色熒光。經(jīng)PKH67標(biāo)記的細(xì)胞可用于體外和體內(nèi)增殖研究，且具有不會(huì)使鄰近細(xì)胞染色的功能。

在細(xì)胞分裂增殖過(guò)程中，PKH67的熒光強(qiáng)度會(huì)隨著細(xì)胞的分裂而逐級(jí)遞減，標(biāo)記熒光可平均分配至兩個(gè)子代細(xì)胞中，因此其熒光強(qiáng)度是親代細(xì)胞的一半，根據(jù)這一特性，它可被用于檢測(cè)細(xì)胞增殖，細(xì)胞周期的估算及細(xì)胞分裂等方面。PKH67標(biāo)記細(xì)胞的熒光非常均一，并且分裂后的子代細(xì)胞的熒光分配也更均一。在細(xì)胞分裂增殖過(guò)程中，PKH67標(biāo)記熒光可平均分配至兩個(gè)子代細(xì)胞中，熒光強(qiáng)度變?yōu)橛H代細(xì)胞的一半，通過(guò)流式細(xì)胞儀根據(jù)熒光強(qiáng)度的不同，可檢測(cè)出未分裂細(xì)胞，分裂一次(1/2的熒光強(qiáng)度)，二次(1/4的熒光強(qiáng)度)，三次(1/8的熒光強(qiáng)度)，以及更多分裂次數(shù)的細(xì)胞。PKH67可檢測(cè)分裂次數(shù)多達(dá)六次甚至更多。

除了用于細(xì)胞增殖檢測(cè)，PKH67 還可以用于細(xì)胞的體外盒體內(nèi)示蹤，標(biāo)記后熒光在胞內(nèi)表達(dá)穩(wěn)定，陽(yáng)性標(biāo)記率達(dá)98%以上，標(biāo)記細(xì)胞形態(tài)良好，能有效地觀察細(xì)胞在體外的誘導(dǎo)分化情況；或?qū)?biāo)記的細(xì)胞注入體內(nèi)，可以有效的顯示移植細(xì)胞在活體組織中的遷移及分化。

PKH67標(biāo)記的細(xì)胞用于體內(nèi)觀察可以長(zhǎng)達(dá)數(shù)周之久，它常被用來(lái)做活體細(xì)胞檢測(cè)實(shí)驗(yàn)和用熒光電鏡觀察細(xì)胞長(zhǎng)期活動(dòng)的實(shí)驗(yàn)。PKH67 毒性較小，不影響細(xì)胞的增殖能力。此方法操作簡(jiǎn)單，且不用放射性同位素，不存在安全隱患?？梢愿焖伲鼫?zhǔn)確和更安全地得到想要的實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)。

PKH67/PI標(biāo)記細(xì)胞后通常用流式細(xì)胞儀進(jìn)行細(xì)胞毒性檢測(cè)。

PKH67標(biāo)記細(xì)胞呈綠色熒光，熒光波長(zhǎng)：λex=490 nm,λem=502 nm。流式檢測(cè)時(shí)的激發(fā)波長(zhǎng)可以選擇488nm，此時(shí)的發(fā)射波長(zhǎng)為502nm，使用流式細(xì)胞儀檢測(cè)時(shí)可以采用FL1 detection channel。PI標(biāo)記細(xì)胞呈紅色熒光，流式檢測(cè)時(shí)的激發(fā)波長(zhǎng)可以選擇488nm，此時(shí)的發(fā)射波長(zhǎng)為647nm，使用流式細(xì)胞儀檢測(cè)時(shí)可以采用FL2 detection channel。

PKH67標(biāo)記的細(xì)胞除了流式細(xì)胞儀檢測(cè)細(xì)胞毒性外，還可單染后用于細(xì)胞增殖檢測(cè)，或者用熒光酶標(biāo)板定量活細(xì)胞數(shù)目，或者用熒光顯微鏡進(jìn)行均一染色的細(xì)胞示蹤觀察。

儲(chǔ)存條件：-20℃避光保存。

步驟和注意事項(xiàng)：?

準(zhǔn)備實(shí)驗(yàn)環(huán)境：?確保實(shí)驗(yàn)區(qū)域清潔，?使用酒精清潔計(jì)數(shù)板和蓋玻片，?然后用吸水紙輕輕擦干。?

細(xì)胞培養(yǎng)：?

準(zhǔn)備試管或培養(yǎng)皿、?細(xì)胞培養(yǎng)基和待培養(yǎng)的細(xì)胞。?

取出保存于低溫下的細(xì)胞苗，?并加入培養(yǎng)基中，?搖晃混合均勻。?

用移液管將細(xì)胞培養(yǎng)基和細(xì)胞種植在試管或培養(yǎng)皿中。?

將試管或培養(yǎng)皿放置于恒溫培養(yǎng)箱中，?定期更換培養(yǎng)液。?

細(xì)胞凍存與復(fù)蘇：?

細(xì)胞系的凍存是將生長(zhǎng)較好的傳代細(xì)胞懸浮在加有冷凍保護(hù)劑的溶液中，?以一定的冷凍速率降至零下某一溫度，?并在此溫度下對(duì)其長(zhǎng)期保存的過(guò)程。?

復(fù)蘇則是將凍存的細(xì)胞系恢復(fù)到常溫的過(guò)程，?原則是“慢凍快融"，?以較大限度地保存細(xì)胞活力。?

細(xì)胞計(jì)數(shù)：?

制備細(xì)胞懸液，?使用消化單層培養(yǎng)細(xì)胞或收集懸浮培養(yǎng)細(xì)胞，?制成單個(gè)細(xì)胞懸液。?

在顯微鏡下，?用10×物鏡觀察計(jì)數(shù)板四角大方格中的細(xì)胞數(shù)，?細(xì)胞壓中線時(shí)，?只計(jì)左側(cè)和上方者，?不計(jì)右側(cè)和下方者。?

熒光顯微鏡使用：?

使用熒光染料對(duì)細(xì)胞進(jìn)行染色，?并觀察細(xì)胞所發(fā)出的熒光信號(hào)，?以研究細(xì)胞結(jié)構(gòu)和功能。?

聚合酶鏈反應(yīng)（?PCR）?：?

準(zhǔn)備PCR反應(yīng)所需的DNA模板、?引物、?聚合酶和核苷酸。?

按照PCR反應(yīng)液配制表制備反應(yīng)液。?

在反應(yīng)器中加入反應(yīng)液，?開(kāi)始PCR反應(yīng)。?

PCR反應(yīng)的成功與否，?可以通過(guò)電泳、?測(cè)序等方法進(jìn)一步確認(rèn)。?

轉(zhuǎn)染：?

準(zhǔn)備轉(zhuǎn)染所需的載體DNA和細(xì)胞。?

制備轉(zhuǎn)染試劑，?將DNA載體溶解于轉(zhuǎn)染試劑中，?與細(xì)胞混合均勻。?

處理轉(zhuǎn)染細(xì)胞，?并進(jìn)行下一步實(shí)驗(yàn)。?

在操作過(guò)程中，?應(yīng)注意實(shí)驗(yàn)室安全規(guī)范，?避免隨意丟棄垃圾，?及時(shí)登記購(gòu)買耗材或試劑，?保持實(shí)驗(yàn)環(huán)境的清潔和安全

下列是公司正在出售的產(chǎn)品：