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規(guī)格	1×106cells/T25培養(yǎng)瓶	種屬	小鼠
貨號	CS-X2044	細(xì)胞形態(tài)	成肌細(xì)胞樣

產(chǎn)品信息：

貨號	CS-X2044	種屬	小鼠
生長特性	貼壁細(xì)胞	細(xì)胞形態(tài)	成肌細(xì)胞樣
溫度	液氮	培養(yǎng)條件:	氣相：空氣，95%；CO2，5%
鑒定	STR鑒定正確	生長培養(yǎng)基	DMEM＋10% FBS＋1% P/S

C2C12 (小鼠成肌細(xì)胞)

商品介紹：

產(chǎn)品名稱：C2C12 (小鼠成肌細(xì)胞)
別稱 C2c12; C2-C12; C12

種屬小鼠

年齡（性別）不詳

組織來源骨骼??；品系：C3H

生長特性貼壁細(xì)胞

細(xì)胞形態(tài) 成肌細(xì)胞樣

背景描述 C2C12細(xì)胞是由D·Yaffe和O·Saxel建立的小鼠成肌細(xì)胞株的亞克??；C2C12細(xì)胞分化很快，形成可伸縮的肌管并生成特征性的肌蛋白。用骨形成蛋白2(BMP-2)處理C2C12細(xì)胞，會導(dǎo)致C2C12細(xì)胞的分化途徑從成肌細(xì)胞轉(zhuǎn)換為成骨細(xì)胞。檢測表明，C2C12細(xì)胞肢骨發(fā)育畸形病毒(鼠痘)陰性。

生物安全等級 1

生長培養(yǎng)基 DMEM＋10% FBS＋1% P/S

推薦傳代比例 1:3-1:4

推薦換液頻率 2~3次/周

倍增時間 ~20小時

凍存條件

凍存液：55% 基礎(chǔ)培養(yǎng)基+40%FBS+5%DMSO

溫度：液氮

培養(yǎng)條件

氣相：空氣，95%；CO2，5%

溫度：37℃

注意事項該細(xì)胞貼壁松散，操作時請盡量輕柔；換液時需預(yù)熱培養(yǎng)基；收貨如有大塊脫落的細(xì)胞團(tuán)，為正?，F(xiàn)象，請按照收貨注意事項處理。

保藏機構(gòu) ATCC; CRL-1772 BCRC; 60083 BCRJ; 0058 DSMZ; ACC-565

細(xì)胞保存方法：

（一）細(xì)胞凍存

1. 配制含10%DMSO或甘油、10～20%小牛血清的凍存培養(yǎng)液；

2. 取對數(shù)生長期的細(xì)胞，去除舊培養(yǎng)液，用PBS清洗。

3. 去除PBS，加入適量（覆蓋培養(yǎng)皿表面）把單層生長的細(xì)胞消化下來；

4. 離心1000rpm，5min；

5. 去除，加入適量配制好的凍存培養(yǎng)液，用吸管輕輕吹打使細(xì)胞均勻，計數(shù)，調(diào)節(jié)凍存液中細(xì)胞的最終密度為5×106/ml～1×107/ml；

6. 將細(xì)胞分裝入凍存管中，每管1～1.5 ml；

7. 在凍存管上標(biāo)明細(xì)胞的名稱，凍存時間及操作者；

8. 凍存：標(biāo)準(zhǔn)的凍存程序為降溫速率-1～-2℃/ min；當(dāng)溫度達(dá)-25℃以下時，可增至-5℃～-10℃/min；到-100℃時，則可迅速浸入液氮中。也可將裝有細(xì)胞的凍存管放入-20℃冰箱2h ，然后放入-70℃冰箱中過夜，取出凍存管，移入液氮容器內(nèi)。

C2C12 (小鼠成肌細(xì)胞)

注意事項：

1）、欲冷凍保存之細(xì)胞應(yīng)在生長良好且存活率高之狀態(tài)，約為80～90%致密度。冷凍前檢測細(xì)胞是否仍保有其性質(zhì)，應(yīng)在冷凍保存前一至二日測試是否有抗體之產(chǎn)生。

2）、細(xì)胞在液氮中可長期凍存無，而不會影響細(xì)胞活力;在-70度可保存數(shù)月。

3）、注意冷凍保護(hù)劑之品質(zhì)。DMSO應(yīng)為試劑級等級，無菌且無色(以0. 22micron FGLP Telflon過濾或是直接購買無菌產(chǎn)品，如Sigma D-2650)，以5～10 ml小體積分裝，4 ℃避光保存，勿作多次解凍。Glycerol亦應(yīng)為試劑級等級，以高壓蒸汽滅菌后避光保存。在開啟后一年內(nèi)使用，因長期儲存后對細(xì)胞會有毒性。本方法中先制備雙倍凍存液，可避免DMSO直接加入時釋放的熱量對細(xì)胞的損傷。緩慢逐滴加入細(xì)胞懸液是使細(xì)胞逐步適應(yīng)高滲，可降低細(xì)胞受損。DMSO可能引起部分白血病細(xì)胞株的分化，可換用10%甘油凍存。

公司正在出售的產(chǎn)品：

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NCI-H2347 (人肺癌細(xì)胞)	C2C12 (小鼠成肌細(xì)胞)艾美耳球蟲屬通用PCR試劑盒
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SNU-387 (人肝癌細(xì)胞)	禽腎炎病毒型PCR檢測試劑盒

操作步驟：

1）、冷凍前24-48小時更換半量或全量培養(yǎng)基，使細(xì)胞處于指數(shù)生長期。

2）、配制冷凍保存溶液(使用前配制)：另取一離心管，加入培養(yǎng)基、血清，逐滴加入二甲基亞砜 (DMSO)至20%濃度，即制成雙倍的凍存液，置于室溫下待用。

3）、離心收集培養(yǎng)之細(xì)胞，用加血清的培養(yǎng)基重懸起細(xì)胞，取少量細(xì)胞懸浮液(約0. 1 ml)計數(shù)細(xì)胞濃度及凍前存活率。

4）、取與細(xì)胞懸液等量的凍存液，緩慢逐滴加入細(xì)胞懸液，并晃動試管，制成細(xì)胞凍存懸液(DMSO后濃度為5～10%)，使細(xì)胞濃度為1～5×106cells/ ml，混合均勻，分裝于已標(biāo)示之冷凍保存管中，1～2 ml/vial，并取少量細(xì)胞懸浮液作污染檢測。嚴(yán)密封口后，注明細(xì)胞名稱、代數(shù)、日期。然后進(jìn)行凍存。