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規(guī)格	5×105Cells/T25培養(yǎng)瓶	組織來源	皮膚組織
貨號	CS-X3044	細胞形態(tài)	上皮細胞樣

產品信息：

貨號	CS-X3044	組織來源	皮膚組織
傳代特性	可傳1-2代	培養(yǎng)基	含FBS、生長添加劑、Penicillin、Streptomycin等
細胞形態(tài)	上皮細胞樣	生長特性	貼壁
培養(yǎng)條件		換液頻率	每2-3天換液一次

人表皮角質形成細胞

商品介紹：

產品名稱：人表皮角質形成細胞
2.組織來源：皮膚組織

3.產品規(guī)格：5×105cells/T25細胞培養(yǎng)瓶

4.細胞簡介：

人表皮角質形成細胞分離自皮膚組織；表皮位于動物皮膚的外層，由胚胎時期外胚層形成，具有抗摩擦和抗損傷的作用。表皮是皮膚的淺層結構，由復層扁平上皮構成。從基底層到表面可分為五層，即基底層、棘層、顆粒層、透明層和角質層。表皮角質形成細胞是一種能合成角質蛋白的上皮細胞，此類細胞為表皮的主體，由表皮深層始逐漸增殖、分化，并在成為角化的角質細胞中，細胞核與細胞器消失，細胞亦失去生理功能而脫落。未脫落部分對機體尚有保護作用，故不必在洗擦身體時用力搓擦，使其過早脫失。表皮角質形成細胞主要分布于表皮基底層，在上皮程序性死亡后，細胞產生角化并移向表皮。體外培養(yǎng)的表皮角化細胞容易導致終末分化，不能充分增殖。角質形成細胞最終產生角質蛋白，在其向角質細胞演變過程中，一般可以分為四層，即基底層、棘層、顆粒層以及角質層。有人把前三層或前二層稱為生發(fā)層或馬爾匹基層。此外，在某些部位，特別在掌跖部位，角質層下方還可見到透明層。

5.方法簡介：

公司實驗室分離的人表皮角質形成層細胞先中性dan白酶消化、后yi蛋白酶-膠原酶混合消化法制備而來，細胞總量約為5×10?cells/瓶。

6.質量檢測：

公司實驗室分離的人表皮角質形成細胞經PCK免疫熒光鑒定，純度可達90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細菌、酵母和真菌等。

7.培養(yǎng)信息：

包被條件鼠尾膠原Ⅰ（2-5μg/cm2）

培養(yǎng)基含FBS、生長添加劑、Penicillin、Streptomycin等

換液頻率每2-3天換液一次

生長特性貼壁

細胞形態(tài) 上皮細胞樣

傳代特性可傳1-2代

消化液 0.25%yi蛋白酶

培養(yǎng)條件氣相：空氣，95%；CO2，5%

細胞保存方法：

（一）細胞凍存

1. 配制含10%DMSO或甘油、10～20%小牛血清的凍存培養(yǎng)液；

2. 取對數生長期的細胞，去除舊培養(yǎng)液，用PBS清洗。

3. 去除PBS，加入適量（覆蓋培養(yǎng)皿表面）把單層生長的細胞消化下來；

4. 離心1000rpm，5min；

5. 去除，加入適量配制好的凍存培養(yǎng)液，用吸管輕輕吹打使細胞均勻，計數，調節(jié)凍存液中細胞的最終密度為5×106/ml～1×107/ml；

6. 將細胞分裝入凍存管中，每管1～1.5 ml；

7. 在凍存管上標明細胞的名稱，凍存時間及操作者；

8. 凍存：標準的凍存程序為降溫速率-1～-2℃/ min；當溫度達-25℃以下時，可增至-5℃～-10℃/min；到-100℃時，則可迅速浸入液氮中。也可將裝有細胞的凍存管放入-20℃冰箱2h ，然后放入-70℃冰箱中過夜，取出凍存管，移入液氮容器內。

人表皮角質形成細胞

注意事項：

1）、欲冷凍保存之細胞應在生長良好且存活率高之狀態(tài)，約為80～90%致密度。冷凍前檢測細胞是否仍保有其性質，應在冷凍保存前一至二日測試是否有抗體之產生。

2）、細胞在液氮中可長期凍存無，而不會影響細胞活力;在-70度可保存數月。

3）、注意冷凍保護劑之品質。DMSO應為試劑級等級，無菌且無色(以0. 22micron FGLP Telflon過濾或是直接購買無菌產品，如Sigma D-2650)，以5～10 ml小體積分裝，4 ℃避光保存，勿作多次解凍。Glycerol亦應為試劑級等級，以高壓蒸汽滅菌后避光保存。在開啟后一年內使用，因長期儲存后對細胞會有毒性。本方法中先制備雙倍凍存液，可避免DMSO直接加入時釋放的熱量對細胞的損傷。緩慢逐滴加入細胞懸液是使細胞逐步適應高滲，可降低細胞受損。DMSO可能引起部分白血病細胞株的分化，可換用10%甘油凍存。

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操作步驟：

1）、冷凍前24-48小時更換半量或全量培養(yǎng)基，使細胞處于指數生長期。

2）、配制冷凍保存溶液(使用前配制)：另取一離心管，加入培養(yǎng)基、血清，逐滴加入二甲基亞砜 (DMSO)至20%濃度，即制成雙倍的凍存液，置于室溫下待用。

3）、離心收集培養(yǎng)之細胞，用加血清的培養(yǎng)基重懸起細胞，取少量細胞懸浮液(約0. 1 ml)計數細胞濃度及凍前存活率。

4）、取與細胞懸液等量的凍存液，緩慢逐滴加入細胞懸液，并晃動試管，制成細胞凍存懸液(DMSO后濃度為5～10%)，使細胞濃度為1～5×106cells/ ml，混合均勻，分裝于已標示之冷凍保存管中，1～2 ml/vial，并取少量細胞懸浮液作污染檢測。嚴密封口后，注明細胞名稱、代數、日期。然后進行凍存。