小鼠嗅鞘細(xì)胞

2.組織來(lái)源：嗅球組織

3.產(chǎn)品規(guī)格：5×105cells/T25細(xì)胞培養(yǎng)瓶

4.細(xì)胞簡(jiǎn)介：

小鼠嗅鞘細(xì)胞分離自嗅球組織；嗅鞘細(xì)胞（OECs）是在功能上介于施旺細(xì)胞和少突膠質(zhì)細(xì)胞之間的一種特殊的膠質(zhì)細(xì)胞，具有神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)、抑制膠質(zhì)增生、瘢痕形成、成鞘作用等；為軸突生長(zhǎng)提供了適宜的微環(huán)境及較強(qiáng)的遷移的特性，使其成為促進(jìn)中樞神經(jīng)再生的理想候選細(xì)胞之一。嗅鞘細(xì)胞是目前所發(fā)現(xiàn)的極少數(shù)的中樞神經(jīng)系統(tǒng)可以再生細(xì)胞之一，其特點(diǎn)為終身具有神經(jīng)再生功能，還能夠釋放多種神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子、神經(jīng)粘附分子。被認(rèn)為是髓鞘化能力強(qiáng)的膠質(zhì)細(xì)胞，逐漸用于治療脊髓損傷。嗅鞘細(xì)胞與膠質(zhì)細(xì)胞、雪旺細(xì)胞在表現(xiàn)型上有共同點(diǎn)，它們都能促進(jìn)軸突的再生，主要區(qū)別在于嗅鞘細(xì)胞不但存在于中樞神經(jīng)系統(tǒng)，也存在于外周神經(jīng)中。嗅鞘細(xì)胞被認(rèn)為是一種可塑性很高的細(xì)胞，它可表現(xiàn)出多種細(xì)胞形態(tài)和細(xì)胞表面標(biāo)志，在嗅系統(tǒng)發(fā)育過(guò)程中，嗅鞘細(xì)胞根據(jù)其在組織定位的不同而有不同的抗原表型，其中P75NTR、GFAP、和O4可標(biāo)記大部分在體嗅鞘細(xì)胞，然而在嗅球外神經(jīng)層O4陽(yáng)性嗅鞘細(xì)胞仍然可以在P75NTR陽(yáng)性細(xì)胞層內(nèi)分化成E-NCAM陽(yáng)性的細(xì)胞層，還有一定比率的嗅鞘細(xì)胞P75NTR陰性而NY和S100表型為陽(yáng)性。嗅黏膜中的神經(jīng)元是生后才生長(zhǎng)并在成年時(shí)繼續(xù)分化的神經(jīng)元，壽命為4-12周，隨著新細(xì)胞的生長(zhǎng)，又建立了新的神經(jīng)支配關(guān)系。嗅鞘細(xì)胞存在于嗅神經(jīng)及嗅球的神經(jīng)層上，沿嗅神經(jīng)的全長(zhǎng)，從周圍神經(jīng)系統(tǒng)到中樞神經(jīng)分布。

5.方法簡(jiǎn)介：

公司實(shí)驗(yàn)室分離的小鼠嗅鞘細(xì)胞采用yi蛋白酶-膠原酶聯(lián)合消化法、結(jié)合差速貼壁法制備而來(lái)，細(xì)胞總量約為5×10?cells/瓶。

6.質(zhì)量檢測(cè)：

公司實(shí)驗(yàn)室分離的小鼠嗅鞘細(xì)胞經(jīng)GFAP免疫熒光鑒定，純度可達(dá)90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細(xì)菌、酵母和真菌等。

7.培養(yǎng)信息：

包被條件 PLL（0.1mg/ml）

培養(yǎng)基 含FBS、生長(zhǎng)添加劑、Penicillin、Streptomycin等

換液頻率 每2-3天換液一次

生長(zhǎng)特性 貼壁

細(xì)胞形態(tài) 神經(jīng)元細(xì)胞樣

傳代特性 屬于終末分化細(xì)胞；屬于不增殖細(xì)胞群

消化液 0.25%yi蛋白酶

培養(yǎng)條件 氣相：空氣，95%；CO2，5%

操作步驟：

步驟1：從冰箱拿出無(wú)血清非程序凍存液，待用

步驟2：離心收集對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的細(xì)胞（貼壁細(xì)胞消化下來(lái)離心，懸浮細(xì)胞直接離心，轉(zhuǎn)速1200rpm或250g，時(shí)間3min）

步驟3：棄上清，加入適量無(wú)血清非程序凍存液，重懸細(xì)胞

步驟4：按照1~1.5mL/管的量分裝到凍存管中，擰緊管蓋，做好標(biāo)記

步驟5：將凍存管直接移入-80℃冰箱中，24h后轉(zhuǎn)移至液氮長(zhǎng)期保存

在沒(méi)有凍存盒或者非程序凍存液時(shí)，可以選擇手動(dòng)梯度降溫。但手動(dòng)梯度降溫不適用于所有細(xì)胞，且效果不穩(wěn)定，同樣需要先做凍存測(cè)試。

注意事項(xiàng)：

1、收到細(xì)胞后，若發(fā)現(xiàn)干冰已揮發(fā)干凈、凍存管瓶蓋脫落、破損及細(xì)胞有污染，請(qǐng)立即與我們聯(lián)系。

2、收到細(xì)胞先不開瓶蓋，瓶身擦拭酒精后放在培養(yǎng)箱靜置2-4小時(shí)（視細(xì)胞密度而定）穩(wěn)定細(xì)胞狀態(tài)。接著在倒置顯微鏡下觀察細(xì)胞生長(zhǎng)情況，并對(duì)細(xì)胞進(jìn)行不同倍數(shù)拍照（建議收細(xì)胞時(shí)就整體外觀拍一張照片，觀察培養(yǎng)基的顏色和是否有漏液情況，隨后在顯微鏡下拍下細(xì)胞狀態(tài)，100*，200*各一張），觀察記錄細(xì)胞在運(yùn)輸過(guò)程中是否有污染情況。作為我方進(jìn)行銷售依據(jù)。

3、由于細(xì)胞狀態(tài)受環(huán)境、操作和運(yùn)輸?shù)榷喾矫嬉蛩赜绊?，故本公司只保證客戶收到細(xì)胞后一周內(nèi)的細(xì)胞狀態(tài)，故客戶需要售后時(shí)需出示收到細(xì)胞的時(shí)間證明及客戶提供收貨時(shí)間和發(fā)現(xiàn)問(wèn)題后客服人員溝通的時(shí)間證明，期間間隔時(shí)間不能大于7天。

4、所有動(dòng)物細(xì)胞均視為有潛在的生物危害性，必須在二級(jí)生物安全臺(tái)內(nèi)操作，并請(qǐng)注意防護(hù)，所有廢液及接觸過(guò)此細(xì)胞的器皿需要滅菌后方能丟棄。

細(xì)胞處理：

1）凍存細(xì)胞的復(fù)蘇：將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入到含4-6mL培養(yǎng)基的離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心3-5min，棄去上清液，培養(yǎng)基重懸細(xì)胞。然后將細(xì)胞懸液加入含6-8ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶（或皿）中37℃培養(yǎng)過(guò)夜。第二天顯微鏡下觀察細(xì)胞生長(zhǎng)情況和細(xì)胞密度。

2）細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá)70%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。該細(xì)胞為懸浮和輕微的貼壁細(xì)胞，傳代可以參考以下方法：

1、收集：將培養(yǎng)瓶中的懸浮的細(xì)胞收集到離心管中。用不含鈣、鎂離子的PBS潤(rùn)洗細(xì)胞1-2次。由于細(xì)胞貼壁不牢PBS潤(rùn)洗后細(xì)胞會(huì)脫落所以PBS也要回收到離心管中。

2、加入0.25％（w / v）0.53 mM EDTA于培養(yǎng)瓶中（T25瓶1-2mL，T75瓶2-3mL）置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘（難消化的細(xì)胞可以適當(dāng)延長(zhǎng)消化時(shí)間），然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況，若細(xì)胞大部分變圓并脫落迅速拿回操作臺(tái)，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加入3-4ml含10%FBS的培養(yǎng)基來(lái)終止消化。

3、將收集到的懸浮細(xì)胞、pbs清洗液中的細(xì)胞和消化下來(lái)的貼壁細(xì)胞以1000rpml離心5min，棄去上清，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后重懸混勻后將細(xì)胞懸液按1：2的比例分到新T25瓶中，添加6-8ml按照說(shuō)明書要求配置的新的培養(yǎng)基以保持細(xì)胞的生長(zhǎng)活力，后續(xù)傳代根據(jù)實(shí)際情況按1:2~1:5的比例進(jìn)行。

3）細(xì)胞凍存:收到細(xì)胞后建議在培養(yǎng)前3代時(shí)凍存一批細(xì)胞種子以備后續(xù)實(shí)驗(yàn)使用。下面T25瓶為例：

1、細(xì)胞凍存時(shí)按照細(xì)胞傳代的過(guò)程收集消化好的細(xì)胞到離心管中，可使用血球計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)，來(lái)決定細(xì)胞的凍存密度。一般細(xì)胞的推薦凍存密度為1×10?~1×10?個(gè)活細(xì)胞/ml.

2、1000rpm離心3-5min，去掉上清。用配制好的細(xì)胞凍存液重懸細(xì)胞 ，按每1ml凍存液含1×10?~1×10?個(gè)活細(xì)胞/ml分配到一個(gè)凍存管中將細(xì)胞分配到凍存管中，標(biāo)注好名稱、代數(shù)、日期等信息。

3、將要凍存的細(xì)胞置于程序降溫盒中，-80度冰箱中過(guò)夜，之后轉(zhuǎn)入液氮容器中儲(chǔ)存。同時(shí)記錄好凍存管在液氮容器中的位置以便后續(xù)查閱和使用。

公司正在出售的產(chǎn)品：

小鼠肝枯否細(xì)胞

小鼠子宮內(nèi)膜上皮細(xì)胞

豬脂肪細(xì)胞

104C1 (轉(zhuǎn)化的豚鼠胎體細(xì)胞)

293T [HEK-293T](人胚腎細(xì)胞)

6T-CEM (人T細(xì)胞白血病細(xì)胞)

A2780 (人卵巢癌細(xì)胞)

Acc-2 (人涎腺腺樣囊性癌細(xì)胞)

Ana-1 (小鼠巨噬細(xì)胞)

B82 (小鼠腫瘤細(xì)胞系)

B-CPAP (人甲狀腺乳頭狀癌細(xì)胞)

BHK-21 [C-13] (倉(cāng)鼠腎成纖維細(xì)胞)

BT-549 (人乳腺管癌細(xì)胞)

C6/36 [Clone C6/36] (蚊子細(xì)胞)

CAL 27 (人舌鱗癌細(xì)胞)

人抗BP180抗體(anti-BP180-Ab)檢測(cè)試劑盒

人鳥氨suan脫羧mei(ODC)ELISA檢測(cè)試劑盒

人核因子κB(NF-κB)檢測(cè)試劑盒

人CD73分子(CD73)檢測(cè)試劑盒

腺病毒D型PCR試劑盒

馬齒莧染料法PCR鑒定試劑盒

鹿特定基因序列PCR檢測(cè)試劑盒

氣管比翼線蟲PCR檢測(cè)試劑盒

堪薩斯分枝桿菌PCR試劑盒

人免疫缺陷病毒II型B組前病毒PCR試劑盒

人乳頭瘤病毒16

小鼠嗅鞘細(xì)胞口蹄疫病毒亞洲1型(FMDV-Asia1)核suan檢測(cè)試劑盒

空腸彎曲菌和結(jié)腸彎曲菌PCR檢測(cè)試劑盒

人皰疹病毒7型PCR試劑盒

腦膜炎奈瑟菌通用型PCR檢測(cè)試劑盒