Ad-mCherry-GFP-LC3B細胞凋亡與增殖LC3是酵母自噬關鍵蛋白ATG8在哺乳動物中的同源蛋白。LC3最初被分析鑒定為microtubule-associated protein 1 light chain 3。LC3蛋白家族包括LC3A、B、C和GABARAP等亞家族，其中對于LC3B的研究為廣泛。到目前為止，LC3B被認為是細胞自噬信號通路為關鍵的標志性蛋白。LC3B是一個具有125個氨基酸殘基的蛋白，在蛋白合成后，被Atg4所酶切而失去了C端的22個氨基酸蛋白，從而暴露出C端的，人們把它命名為胞質形式的LC3B I。在細胞自噬的過程中，其C端暴露的經過一個類似泛素化的過程，以ATG7為E1樣激活酶， 以ATG3為E2樣連接酶，以Atg12-Atg5-Atg16復合物為E3樣連接酶，在C端甘上共價連接上磷脂酰(phosphatidylethanolamine,PE)而成為LC3B-PE即LC3B II。與胞質定位的LC3B I不同，LC3B II定位于自噬體的內膜和外膜上。在自噬體與溶酶體融合后，自噬體外膜上的LC3B II被Atg4所酶切，而自噬體內膜上的LC3B II則被溶酶體內的蛋白酶所降解。盡管LC3B II比LC3B I的分子量要大，但由于其的疏水性，在SDS-PAGE電泳時，LC3B II比LC3B I遷移得更快，其表觀分子量分別為14kD和16kD。在用GFP-LC3B腺病毒感染細胞后，在非自噬的情況下，熒光顯微鏡下GFP-LC3B以彌散的形式存在于細胞質中；而在自噬的情況下，熒光顯微鏡下GFP-LC3B則聚集在自噬體膜上，以斑點的形式表現(xiàn)出來。

自噬是一種在進化上高度保守的通過溶酶體吞噬并降解部分自身組分的細胞內分解代謝途徑。自噬與多種生理功能有關，在饑餓等不利的環(huán)境條件下， 細胞通過自噬降解多余或異常的細胞內組分，為細胞的生存提供能量及原材料，促進生物體的生長發(fā)育、細胞分化及對環(huán)境變化產生應答。自噬異常與多種病理過程如腫瘤、神經退行性疾病、代謝疾病、病原體感染等都有密切關系。由于細胞自噬在生理和病理過程中都有重要作用，自噬已經成為細胞生物學領域的一個新的研究熱點。

Ad-mCherry-GFP-LC3B是的重組腺病毒，感染后能夠在靶細胞中有效表達紅色熒光蛋白mCherry、綠色熒光蛋白(GFP)和LC3B的融合蛋白，呈現(xiàn)明亮的紅色和綠色熒光，可以用于細胞自噬的檢測。

自噬小體在與溶酶體融合過程中，溶酶體內的酸性環(huán)境會導致GFP熒光淬滅，這為追蹤GFP-LC3B的細胞定位增加了難度。mCherry是一種來自于蘑菇珊瑚(mushroom coral)的單體紅色熒光蛋白，當其與GFP進行LC3B的共同標記時，在GFP被溶酶體酸性環(huán)境所淬滅的情況下，可以發(fā)出紅色熒光的mCherry因為其的穩(wěn)定性而被保留。因此，通過融合表達mCherry-GFP-LC3B蛋白，可以非常有效地追蹤自噬過程。在用Ad-mCherry-GFP-LC3B腺病毒感染細胞后，在非自噬的情況下，熒光顯微鏡下mCherry-GFP-LC3B以彌散的黃色熒光(mCherry和GFP的綜合效果)形式存在于細胞質中；而在自噬的情況下，熒光顯微鏡下mCherry-GFP-LC3B則聚集在自噬體膜上，以黃色斑點的形式表現(xiàn)出來(LC3B dot or punctae)；當自噬體與溶酶體融合后，因GFP熒光的部分淬滅而以紅色斑點的形式表現(xiàn)出來。

腺病毒感染細胞后為瞬時表達，通常不會與基因組DNA重組，不能用于篩選穩(wěn)定細胞株。本產品感染體內外細胞后，有效表達時間通常不少于7天，不同細胞和組織的有效表達時間有所不同。感染10-14天后融合蛋白的表達很可能會大大減弱。

本產品可以在表達E1的HEK293A、HEK293等適當細胞中擴增。

本產品的滴度≥1×108 pfu/ml，使用時可以按照108pfu/ml進行計算。如果按照20 MOI感染6孔板的細胞，每孔50萬細胞計算，共可以感染10個孔；如果按照20 MOI感染24孔板的細胞，每孔10萬細胞計算，共可以感染50個孔。如果MOI值提高，則相應可以感染的孔數(shù)會減少；如果MOI值降低，則相應可以感染的孔數(shù)會增加。

儲存條件：-20℃，有效期1～2個月。

本品是一種可以表達mCherry-GFP-LC3B融合蛋白的腺病毒，可以用于感染細胞或組織后進行細胞自噬的檢測。

細胞生物學研究有以下幾個方面：

細胞生物學的研究內容十分廣泛,主要包括：

①細胞核、染色體以及基因表達的研究；

②生物膜與細胞器的研究；

③細胞骨架體系的研究；

④細胞增殖及其調控；

⑤細胞分化及其調控；

⑥細胞的衰老與編程性死亡(凋亡)；

⑦細胞的起源與進化；

⑧細胞工程.

細胞生物學研究的常用技術有哪些：

1.顯微技術：包括顯微觀察,顯微操作.

2細胞組分分析技術：離心分離技術,生物大分子定位技術,定量細胞化學分析技術.

3.細胞工程：細胞培養(yǎng)。

注意事項：

1. 本試劑盒的檢測試劑中含有螢光素酶，反復凍融會導致其逐漸失活。盡管經測試本試劑反復凍融5次對于其檢測效果無顯著影響，為取得良好的使用效果，*次解凍后可適當分裝保存。反復凍融過程中，可能會導致檢測試劑中出現(xiàn)少量沉淀，此時宜平衡至室溫，并盡量溶解。如仍有殘留的不溶物，可以離心去除后使用，經測試不會影響后續(xù)的檢測效果。

2. 檢測時需使用白色或黑色的96孔板或384孔板。如果使用普通透明的96孔板或384孔板，相鄰孔之間會產生相互干擾。

3. 使用說明中提供了檢測ATP標準品的方法，實際檢測細胞活力時通常并不需要檢測ATP標準品。
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