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上海滬宇生物科技有限公司

SD大鼠神經(jīng)視網(wǎng)膜組織分離和鑒定

時間:2013-9-5閱讀:1684
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實驗試劑
1%戊*鈉,液氮,HE染色劑,4%多聚甲醛,二甲苯,蘇木素-伊紅,2.5%戊二醛,0.1mol/L磷酸緩沖液,1%餓酸,丙酮,環(huán)氧樹脂618,醋酸鈾,枸椽酸鉛
實驗設備
解剖顯微鏡,凍存管,光鏡,LKB超薄切片機,透射電鏡(transmission electron- microscopeTEM)
實驗材料
成年雄性SD大鼠
實驗步驟
1. 成年雄性SD大鼠50只,體重300 g左右。1%戊*鈉30 mg/kg,腹腔注射,頸推脫臼處死。
2. 摘除眼球,分離神經(jīng)視網(wǎng)膜組織。
3. 解剖顯微鏡下沿角膜緣切開眼球,去除角膜、晶體和玻璃體,剝離神經(jīng)視網(wǎng)膜組織,用預冷去離子水沖洗,濾紙吸干水分。置凍存管內(nèi),用做組織總蛋白提取。
4. 部分分離的神經(jīng)視網(wǎng)膜組織,立即液氮凍存。7 um快速冰凍切片,HE染色,封片鏡檢。
5. 部分神經(jīng)視網(wǎng)膜組織,立即用4%多聚甲醛固定24小時,常規(guī)石蠟包埋,4um連續(xù)切片,二甲苯脫蠟,蘇木素-伊紅染色,常規(guī)脫水,透明,封片,光鏡觀察。
6. 部分神經(jīng)視網(wǎng)膜組織,立即用2.5%戊二醛4固定2小時,0.1mol/L磷酸緩沖液沖洗,1%餓酸后固定2小時,丙酮梯度脫水,環(huán)氧樹脂618包埋,LKB超薄切片機切片,電子染色、醋酸鈾、枸椽酸鉛各15 min。透射電鏡(transmission electron- microscope,TEM)觀察攝片。
 
 

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