抗原修復(fù)（antigen retrieval；AR）是否可能?理論研究上尚未清楚，但是以高溫、高壓對(duì)常規(guī)固定石蠟切片進(jìn)行抗原修復(fù)處理的實(shí)踐表明，可以提高抗原—抗體陽性檢測(cè)率，同時(shí)也可能會(huì)出現(xiàn)假陽性，現(xiàn)已廣泛應(yīng)用于免疫組織化學(xué)。尤其對(duì)原來僅表達(dá)在冰凍切片上的抗原，利用AR后極大部分抗體能用于常規(guī)甲醛固定的石蠟切片上，這對(duì)IHC回顧性研究和臨床病理IHC鑒別診斷，腫瘤患者術(shù)后的預(yù)后檢測(cè)及療效評(píng)估和各種癌基因蛋白、轉(zhuǎn)錄調(diào)控因子、細(xì)胞凋亡因子等的檢測(cè)均具有積極的意義。

1、AR的簡(jiǎn)單回顧

自1893年Ferdinand Blum創(chuàng)立組織固定以來，為了避免甲醛固定對(duì)抗原決定簇的影響．許多研究者經(jīng)過幾十年的努力，發(fā)現(xiàn)沒有一種固定液可對(duì)所有的抗原起保護(hù)作用，而且形態(tài)學(xué)保存上遠(yuǎn)沒有甲醛好。為了很好解決這一矛盾，試圖將破壞或交聯(lián)的抗原進(jìn)行逆轉(zhuǎn)，這一直是從事IHC工作的目標(biāo)，并進(jìn)行了很多嘗試，例如用酶消化暴露抗原決定簇，但不呈對(duì)所有的抗原檢測(cè)都有效。Shi等（1991）根據(jù)20世紀(jì)40年代Fraenkel - Conrat等的研究結(jié)果，發(fā)現(xiàn)甲醛固定可使蛋白發(fā)生不同程度的交聯(lián)，用高溫（120~C）或強(qiáng)堿可使交聯(lián)打開，提出了AR的概念。隨后許多研究者的研究結(jié)果都證實(shí)了高溫可使IHC的陽性檢測(cè)率大大提高，原僅表達(dá)在冰凍切片上的大量抗體，都能用于常規(guī)甲醛固定的石蠟切片檢測(cè)。為主Gown（1993）和Boon（1995）分別給予高度的評(píng)價(jià)，認(rèn)為是一種新技術(shù)的革命和病理學(xué)的突破。

目前有關(guān)AR的報(bào)道文獻(xiàn)已超過上千篇，可概括為：理論上研究尚未清楚，但是以高溫、高壓對(duì)常規(guī)固定石蠟切片進(jìn)行AR，可以提高抗原—抗體的陽性檢測(cè)率，同時(shí)也會(huì)出現(xiàn)假陽性，其應(yīng)用范圍已超出IHC，例如TUNEL、ISH／FISH和DNA／RNA的三提。

2、抗原修復(fù)的可能機(jī)制

由于當(dāng)前對(duì)甲醛固定組織會(huì)發(fā)生什么樣的化學(xué)反應(yīng)，尤其是對(duì)蛋白質(zhì)的立體構(gòu)象會(huì)產(chǎn)生什么樣的影響尚不十分清楚，因而，導(dǎo)致對(duì)抗原修復(fù)的機(jī)制也不十分清楚?？赡艿臋C(jī)制可歸納如下三條。*，由于甲醛固定可使蛋白與甲醛、蛋白與蛋白、蛋白與核酸之間通過甲基之橋形成交聯(lián)，抗原決定簇被遮蔽，可通過高溫、鹽緩沖液使交聯(lián)的蛋白水解，斷開交聯(lián)。Beebe等（1999）的實(shí)驗(yàn)結(jié)果已證實(shí)，加溫可以水解交聯(lián)。他們用純甘油作為抗原修復(fù)液，100℃加熱10min，IHC檢測(cè)存檔的石蠟切片，結(jié)果6種標(biāo)記物全部為陰性；當(dāng)在純甘油中二人10％蒸餾水后，結(jié)果在同一張切片上獲得了滿意的陽性結(jié)果。第二種觀點(diǎn)認(rèn)為組織用三醛固定時(shí)，會(huì)形成蛋白—甲醛—鈣復(fù)合體，并遮蔽了抗原決定簇，可通過高溫使鈣離子釋放。并與修復(fù)液中的鈣螯合物—檸檬酸結(jié)合，使抗原決定簇暴露，這種假說也得到了實(shí)驗(yàn)的三實(shí)。Morgan等（1994，1997）用1％CaCiz作為抗原修復(fù)液，同樣高溫修復(fù)10min，IHC檢測(cè)Ki67和血小板反應(yīng)蛋白為陰性；用o．Olmol／L檸檬酸緩沖液進(jìn)行抗原修復(fù)，獲得了陽性結(jié)果。第三種觀點(diǎn)認(rèn)為，經(jīng)甲醛固定后，可形成甲醛化蛋白的三維空間，加熱后可恢復(fù)蛋三貢自然的三維空間，使抗原得以修復(fù)。抗原決定簇又稱抗原表位（epitope），是與相應(yīng)抗體特性結(jié)合的部位，決定和控制抗原特異性的特殊化學(xué)基團(tuán)，其抗原蛋白受到甲醛固定而使蛋白質(zhì)三維結(jié)構(gòu)發(fā)生改變，氨基酸側(cè)鏈上的咪唑和吲哚基團(tuán)（抗原活性基團(tuán)）受到遮蔽，而影響抗原—抗體的結(jié)合。除了上述三種機(jī)制外，可能還存在其他的AR機(jī)制。作者認(rèn)為，在一個(gè)具有三維空間結(jié)構(gòu)的天然蛋白質(zhì)抗原分子中，由于存在于抗原分子表面的抗原決定簇易被抗體分子識(shí)別，從分子的立體構(gòu)型來看，這些抗原決定簇常分布于抗原分子表面突出的位置上，即肽鏈的轉(zhuǎn)角或末端；而有些抗原決定簇則被抗原分子本身掩蓋在、內(nèi)部，正常情況下不能被抗體分子識(shí)別，當(dāng)用高溫加熱時(shí)，使蛋白質(zhì)三維空間構(gòu)象發(fā)生改變，使遮蔽的抗原決定簇暴露。這一點(diǎn)可以解釋為什么某些抗原在冰凍切片上檢測(cè)不到，而采用高溫處理后，石蠟切片能得到很好地顯示。另外，某些非交聯(lián)劑固定的細(xì)胞涂片也用AR，獲得了很好的結(jié)果。根據(jù)實(shí)踐經(jīng)驗(yàn)認(rèn)識(shí)到，以上幾種修復(fù)機(jī)理可能同時(shí)存在，也可能在不同條件下存在不同AR機(jī)理，這可能導(dǎo)致不同抗原檢測(cè)需不同AR的條件。

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