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上海滬宇生物科技有限公司

Feulgen反應(yīng)實(shí)驗(yàn)步驟

時(shí)間：2012-4-13閱讀：2735
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標(biāo)本需經(jīng)固定后方可染色，Carnoy固定液可按無水乙醇：三 氯 甲烷：冰 醋 酸為6：3：1比例配制。固定后石蠟切片即可。盡量不用新鮮組織恒冷箱切片，因胞質(zhì)中存在的縮醛 磷脂會(huì)出現(xiàn)非特異染色。若必須使用恒冷箱切片，需做切片后固定。用已固定的組織石蠟切片可消除縮醛 磷 脂。減少非特異染色，具體操作如下：

1．切片脫蠟入水；
2．用lmol/L H Cl浸洗；
3．切片放人預(yù)熱到60℃1mol/LH Ci內(nèi)6分鐘，（固定的標(biāo)本為10～15分鐘．Susa固定的標(biāo)本為18分鐘，水解時(shí)間因固定液不同而有差異）；
4．入室溫lmol/LH  Cl洗；
5．蒸餾水洗；
6．人Schiff液，于室溫暗處（或外包黑紙）30～60分鐘；
7．人亞硫 酸 鈉水溶液漂洗3次，每次1～2分鐘；
亞硫 酸 鈉水溶液配法：
10%NaHS03 5ml
1mol/L HCl 5ml
加蒸餾水至 100ml
8．蒸餾水洗；
9．脫水、透明、封固。
結(jié)果：細(xì)胞核內(nèi)DNA染成紫紅色
對(duì)照實(shí)驗(yàn)：
雖然Feulgen法是DNA 的特異染色方法，但如果延長水解時(shí)間并在室溫下進(jìn)行反應(yīng)， Schiff試劑也與醛、酮、醇和縮醛磷脂起反應(yīng)，因此用Feulgen法檢測DNA時(shí)必須嚴(yán)格控制鹽酸水解的時(shí)間和溫度。為減少假陽性和非特異性染色必須做對(duì)照實(shí)驗(yàn)?？砂瓷鲜霾襟E做平行對(duì)照實(shí)驗(yàn)，僅將第3步，即60℃ lmol/LHCl水解改為室溫15分鐘，其余與上述步驟相同，結(jié)果DNA應(yīng)為Feulgen陰性反應(yīng)。
Feulgen反應(yīng)圖
大鼠腎小體和腎小管細(xì)胞核呈nigert陽性反應(yīng)，含紫紅色反應(yīng)產(chǎn)物

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