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時(shí)間:2012-7-9閱讀:755
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     實(shí)驗(yàn)開(kāi)始前,各試劑均應(yīng)平衡至室溫,試劑不能直接在37 溶解;試劑或樣品配制時(shí),均需充分混勻,混勻時(shí)盡量避免起泡。實(shí)驗(yàn)前應(yīng)預(yù)測(cè)樣品含量,如樣品濃度過(guò)高時(shí),應(yīng)對(duì)樣品進(jìn)行稀釋?zhuān)允瓜♂尯蟮臉悠贩显噭┖械臋z測(cè)范圍,計(jì)算時(shí)再乘以相應(yīng)的稀釋倍數(shù)。
1、加樣:分別設(shè)空白孔、標(biāo)準(zhǔn)孔、待測(cè)樣品孔??瞻卓准訕悠废♂屢?00 ,余孔分別加標(biāo)準(zhǔn)品或待測(cè)樣品100 ,注意不要有氣泡,加樣時(shí)將樣品加于酶標(biāo)板底部,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動(dòng)混勻,酶標(biāo)板加上蓋或覆膜,37 溫育2 小時(shí)。為保證實(shí)驗(yàn)結(jié)果有效性,每次實(shí)驗(yàn)請(qǐng)使用新的標(biāo)準(zhǔn)品溶液。
2、棄去液體,甩干,不用洗滌。每孔加檢測(cè)溶液A 工作液100 (臨用前配制),酶標(biāo)板加上覆膜,37 溫育1 小時(shí)。
3、棄去孔內(nèi)液體,甩干,洗板3 次,每次浸泡1-2 分鐘,大約400 /每孔,甩干(也可輕拍將孔內(nèi)液體拍干)。
4、每孔加檢測(cè)溶液B 工作液(臨用前配制)100 ,加上覆膜,37 溫育1 小時(shí)。
5、棄去孔內(nèi)液體,甩干,洗板5 次,方法同步驟3。
6、每孔加底物溶液90 ,酶標(biāo)板加上覆膜37 避光顯色(反應(yīng)時(shí)間控制在15-30 分鐘,當(dāng)標(biāo)準(zhǔn)孔的前3-4 孔有明顯的梯度藍(lán)色,后3-4 孔梯度不明顯時(shí),即可終止)。
7、每孔加終止溶液50 ,終止反應(yīng),此時(shí)藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色。終止液的加入順序應(yīng)盡量與底物液的加入順序相同。
8、立即用酶標(biāo)儀在450nm 波長(zhǎng)測(cè)量各孔的光密度(OD 值)。

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