1

藍(lán)靛果

 [Lonicera edulis Turcz.]別名藍(lán)靛果忍冬、藍(lán)果忍冬、藍(lán)果，俗稱山茄子、羊奶子、黑瞎子果，為忍冬科忍冬屬多年生落葉小灌木，果實(shí)為藍(lán)色小漿果，具有很高的食用與保健價(jià)值。

1.2

植物組織培養(yǎng)

在無菌條件下，將離體的植物器官、組織、細(xì)胞或原生質(zhì)體等，培養(yǎng)在人工培養(yǎng)基和人工控制的環(huán)境中，使其再生新植株的過程和技術(shù)。（GB/T 16620）

1.3

外植體

用于植物組織培養(yǎng)的離體植物器官、組織、細(xì)胞以及原生質(zhì)體等。

1.4

培養(yǎng)基

根據(jù)植物營養(yǎng)原理與植物組織培養(yǎng)的要求人工配制的營養(yǎng)基質(zhì)。

1.5

培養(yǎng)基母液

按試劑種類和性質(zhì)分別配制的高于培養(yǎng)基配方濃度的溶液。

1.6

植物生長物質(zhì)

調(diào)節(jié)植物生長發(fā)育的物質(zhì)，包括植物激素和植物生長調(diào)節(jié)劑。常用的植物生長物質(zhì)有生長素類似物IBA（吲哚丁酸）、6-BA（6-芐氨基腺嘌呤）、NAA（萘乙酸）、KT（激動(dòng)素）等。

1.7

外植體滅菌

將外植體表面的微生物*殺死并盡可能少傷害外植體組織和表層細(xì)胞的過程。

1.8

接種

將滅菌后的外植體在無菌條件下接入培養(yǎng)容器內(nèi)的培養(yǎng)基中的過程。

1.9

誘導(dǎo)培養(yǎng)

將滅菌后的外植體接種到誘導(dǎo)愈傷組織等器官培養(yǎng)基中進(jìn)行培養(yǎng)的過程。

1.10

繼代培養(yǎng)

培養(yǎng)過程中將培養(yǎng)材料周期性地分株、分割等操作后，轉(zhuǎn)接入新鮮培養(yǎng)基中繼續(xù)培養(yǎng)的過程。

1.11

生根培養(yǎng)

將不定芽轉(zhuǎn)移到生根誘導(dǎo)培養(yǎng)基中誘導(dǎo)生根，生成完整植株的過程。

1.12

移栽

組培苗在培養(yǎng)瓶中長出一定數(shù)量的根或根原基后，從瓶中取出移植到基質(zhì)中的過程。

2　實(shí)驗(yàn)設(shè)備

2.1

滅菌設(shè)備

高壓蒸汽滅菌鍋、紫外燈。

2.2

接種設(shè)備

超凈工作臺(tái)、槍式鑷子、眼科用解剖剪、*、酒精燈等。

2.3

培養(yǎng)設(shè)備

培養(yǎng)容器瓶（罐頭瓶）、培養(yǎng)架、空調(diào)、照明燈管。

2.4

實(shí)驗(yàn)設(shè)備

電子天平（0.01mg）、冰箱、pH 5.0～7.0精密試紙、酸度計(jì)、溫濕度表、照度計(jì)、燒杯、試劑瓶、量筒、容量瓶、移液槍等。

3　環(huán)境設(shè)備消毒滅菌

3.1

接種室消毒滅菌

接種前用紫外燈照射30min，每周用*及甲醛混合薰蒸。

3.2

培養(yǎng)室消毒滅菌

每周用*及甲醛混合薰蒸。 

3.3

超凈工作臺(tái)的消毒滅菌

接種前用紫外燈照射30min，并用70％酒精擦拭臺(tái)面，定期清洗超凈工作臺(tái)過濾膜。

3.4

接種器具的消毒滅菌

使用前將槍式鑷子、解剖剪、培養(yǎng)皿、*進(jìn)行高溫蒸汽消毒；接種過程中采用酒精燈灼燒消毒。

4　組培育苗

4.1

培養(yǎng)基制備

4.1.1

母液配制及保存

選用化學(xué)純或分析純的化學(xué)藥品，根據(jù)MS培養(yǎng)基配方，分別配制大量元素（50倍）、微量元素（100倍）、鐵鹽（200倍）、有機(jī)物（100倍）、植物生長調(diào)節(jié)物質(zhì)（0.1～0.5mg/mL）幾種化合物的母液（見附件A.1和附件A.2），將母液保存在4℃的冰箱里。

4.1.2

培養(yǎng)基配制

根據(jù)培養(yǎng)基配方需求，每升培養(yǎng)基中分別加入瓊脂粉（6.5g）、蔗糖（30g）和各類母液，依次溶解于蒸餾水，定容后用0.1mol/L HCl或0.1mol/L lNaOH溶液調(diào)節(jié)pH=5.8，定量分裝至培養(yǎng)瓶中并封口，制備成培養(yǎng)基，備用。培養(yǎng)基配制流程見下圖。

圖

4.2

培養(yǎng)基滅菌

瓶裝培養(yǎng)基在10h內(nèi)完成滅菌，滅菌方式采用高壓蒸汽滅菌，在壓力0.105MPa、溫度121℃條件下滅菌20min～30min。鍋內(nèi)的滅菌物以不超過鍋的容量3/4為宜，高壓滅菌時(shí)鍋內(nèi)使用蒸餾水。

4.3

培養(yǎng)基保存

滅菌后的培養(yǎng)基放入接種室，常溫條件下7d內(nèi)使用，2℃～4℃條件下14d內(nèi)使用。培養(yǎng)基應(yīng)保存于潔凈環(huán)境中，注意避光和防塵。

4.4

外植體接種

4.4.1

外植體的選擇

選擇生長健康、強(qiáng)壯的植株作為采樣母株，剪取母樹下部的半木質(zhì)化的莖段作為外植體，采樣時(shí)間宜選擇晴天或露水干后采集。

4.4.2

外植體滅菌

先將外植體用洗滌劑作表面清洗，清除表面的塵土，再將外植體用流水沖洗30min后，將外植體放入消毒瓶中。把裝有外植體的消毒瓶放入超凈工作臺(tái)，在超凈工作臺(tái)上打開裝有外植體的消毒瓶，倒入70%酒精并搖晃消毒瓶，浸泡消毒10s，倒去酒精，用無菌水沖洗外植體3次～5次；然后用0.1% HgCl2浸泡8min，無菌水沖洗3次～5次，用無菌濾紙吸干外植體表面的水分。

4.4.3

外植體切割

將表面消毒后的外植體切割，接入培養(yǎng)基中。莖在接種前用*刀剪去兩端，長1.0 cm～2.0cm。

4.4.4

外植體接種

操作時(shí)，先將培養(yǎng)瓶的封口膜輕輕取下，放在一邊，將培養(yǎng)瓶口在酒精燈外焰上旋轉(zhuǎn)灼燒消毒，殺死瓶口的微生物。將槍式鑷子在酒精燈上灼燒消毒并冷卻后，將外植體接種到培養(yǎng)基中，每個(gè)培養(yǎng)瓶放3個(gè)外植體，接種后蓋上封口膜，并標(biāo)注日期。

4.5

組培苗培養(yǎng)條件

培養(yǎng)室的溫度控制在25℃±3℃，相對(duì)空氣濕度控制在70%～80%，光照強(qiáng)度為27μmol?m-2?s-1～36μmol?m-2?s-1，光照時(shí)間為12h/d。

4.5.1

誘導(dǎo)培養(yǎng)

將外植體接種到誘導(dǎo)培養(yǎng)基中，誘導(dǎo)培養(yǎng)基選用：MS基本培養(yǎng)基+6-BA 1.0 mg/L+IBA 0.2 mg/L，培養(yǎng)20d～25d后進(jìn)行繼代增殖培養(yǎng)。

4.5.2

繼代增殖培養(yǎng)

外植體經(jīng)誘導(dǎo)培養(yǎng)生成愈傷組織或叢生芽，轉(zhuǎn)接至增殖培養(yǎng)基中繼代培養(yǎng)，繼代增殖培養(yǎng)基可選用：MS基本培養(yǎng)基+6-BA 0.5mg/L+IBA 0.3mg/L+KT 1.0 mg/L，培養(yǎng)30-35d。

4.5.3

生根培養(yǎng)

選取培養(yǎng)瓶中長度1.5cm～3.0cm生長健壯的芽接種至生根培養(yǎng)基中，生根培養(yǎng)基可選用：1/2MS基本培養(yǎng)基+NAA 0.5mg/L+IBA 1.0mg/L。培養(yǎng)25d～35d,組培苗生長過程中在基部會(huì)出現(xiàn)白色嫩根，25d后平均生根數(shù)3條以上，根長約在1.0cm～4.0cm。

4.6

煉苗

4.6.1

煉苗標(biāo)準(zhǔn)

當(dāng)組培幼苗基部長出3條以上長1.0cm～4.0cm的新根、苗高3～8cm，即可進(jìn)行煉苗處理。

4.6.2

組培苗馴化

將裝組培苗的培養(yǎng)瓶從培養(yǎng)架上輕輕取下，迅速轉(zhuǎn)移到日光溫室中，自然散射光下煉苗，溫度控制在20℃～25℃，每天中午在培養(yǎng)瓶周圍噴灑霧水，以保濕降溫，封口煉苗1d～2d。

4.6.3

開瓶鍛煉

封口煉苗后打開瓶口，向瓶內(nèi)注入超過培養(yǎng)基表面0.5cm高的自來水，溫度控制在20℃～25℃，

2d～4d后即可移栽。

4.6.4

組培苗質(zhì)量與分級(jí)

按照株高高矮分級(jí)，分2級(jí)，即苗高≦5cm和﹥5cm。

4.7

移栽苗

用手指或鑷子輕輕取出組培苗，用清水洗去苗基部的培養(yǎng)基，移栽至裝有黑壤土、草碳土和細(xì)河沙（混合比例為2：1：1）的混合基質(zhì)的育苗盤中，育苗基質(zhì)中按每立方米基質(zhì)加入1kg磷酸二氫銨。育苗盤規(guī)格為35cm×50cm，育苗盤四壁高度不能低于7cm，育苗基質(zhì)放入育苗容器并澆透水后，厚度應(yīng)不小于5cm。

4.8

移栽苗管理

育苗期保持育苗基質(zhì)見干見濕，育苗水分管理按照GB/T 6001進(jìn)行。溫室空氣濕度應(yīng)保持70%～80%，溫度應(yīng)在18℃～25℃。

4.9

病蟲害管理

藍(lán)靛果苗期病害主要為立枯病。主要防治方法：育苗前使用0.05%炭疽福美作藥土防治，或50%多菌靈、70%甲基硫菌靈等作藥土防治，每平方米用藥8～9克；幼苗發(fā)病前期噴藥防治，選用70%土菌消（惡霉靈）可濕性粉1000倍液，或70%甲基硫菌靈可濕性粉劑800倍液，隔周噴施，共噴兩次。

蟲害主要是螞蟻。防治方法：應(yīng)在育苗床周邊撒一圈百蟲靈等驅(qū)蟻藥。