一、原理

　　球狀蛋白質(zhì)一般都可以在低鹽溶液或蒸餾水表面形成不溶解的變性薄膜，若濃度合適，則肽鏈伸展形成蛋白質(zhì)單分子層。一般用堿性蛋白質(zhì)包圍帶負(fù)電的核酸分子，當(dāng)?shù)鞍踪|(zhì)展開(kāi)時(shí)，核酸也隨之展開(kāi)，核酸的形態(tài)結(jié)構(gòu)將保持一定的完整性。然后將核酸分子撈到支持膜上，經(jīng)過(guò)負(fù)染色，就可以在電鏡下觀察。

　　二、目的

　　觀察質(zhì)粒DNA在電鏡下的形態(tài)，掌握質(zhì)粒DNA的電鏡制樣原理和方法。

　　三、材料、試劑和儀器

　　1、純化的質(zhì)粒DNA樣品。

　　2、火棉膠。

　　3、醋酸異戊酯。

　　4、干凈銅網(wǎng)。

　　5、真空噴鍍儀。

　　6、醋酸鈾水溶液。

　　7、鉑銥合金。

　　8、展開(kāi)儲(chǔ)備液（0.1mg/L*，1mol/L醋酸銨）。

　　9、*。

　　10、電子顯微鏡。

　　四、操作步驟

　　1、稱取3克火棉膠溶解于100ml的醋酸異戊酯中，制成3％的溶液。

　　2、用滴管吸取該液，滴1－2滴于清潔的水面上，當(dāng)醋酸異戊酯揮發(fā)后，在水面上形成一層均勻的火棉膠膜。

　　3、用鑷子小心地將干凈的銅網(wǎng)間隔一定距離排列在膜上。

　　4、在這些銅網(wǎng)上輕輕覆蓋一張適當(dāng)大小的濾紙，待濾紙濕潤(rùn)后將濾紙連同銅網(wǎng)、火棉膠膜輕輕撈起，銅網(wǎng)向上放于一干凈培養(yǎng)皿中晾干備用。

　　5、將核酸樣品（濃度為5mg/ml-10mg/ml）加到展開(kāi)溶液中，終濃度為1mg/ml-0.5mg/ml，作為上相液。

　　6、將重蒸水注入干凈的培養(yǎng)皿中，作為下相液。

　　7、將干凈的載玻片斜放在培養(yǎng)皿中，在水表面撒少量*，以指示單分子膜的展開(kāi)情況。

　　8、取50ul左右的上相液，在離下相液表面1cm處輕輕滴到斜面上，使上相液緩緩觸及下相液表面并形成一層單分子膜。

　　9、用鑷子夾著銅網(wǎng)，膜面朝下，輕輕沾取下相液表面的核酸分子。用濾紙吸去多余的液體，晾干備用。

　　10、用醋酸雙氧鈾染色15分鐘，蒸餾水洗3次，每次10分鐘，晾干備用。

　　11、在真空噴鍍儀中用鉑銥合金投影，以進(jìn)一步增加電子反差。

　　12、電鏡觀察。