超聲波是一種可控的細(xì)胞分裂手段,超聲波的機(jī)械效應(yīng)可以更快更全面地滲透到細(xì)胞物質(zhì)中,提高物質(zhì)的傳遞。超聲波能使溶劑對(duì)植物組織有更大的滲透能力,并能改善傳質(zhì)。超聲空化破壞細(xì)胞壁,促進(jìn)基質(zhì)成分的釋放。在超聲波粉碎機(jī)的強(qiáng)超聲波作用下,細(xì)胞或亞細(xì)胞中的酶或蛋白質(zhì)會(huì)因細(xì)胞分裂而釋放出來。細(xì)胞分裂是一個(gè)敏感的過程,因?yàn)榧?xì)胞壁可以承受體內(nèi)的高滲透壓,必須控制細(xì)胞分裂的力度,以避免釋放不需要的物質(zhì),包括細(xì)胞碎片和核酸,或變性。那我們?cè)谑褂脮r(shí)需要注意些什么呢?
1、切勿空載,啟動(dòng)機(jī)器前,超聲波探頭必須插入樣品中。
2、超聲波探頭水深:1.5Cm左右,液面高度30mm以上。探頭應(yīng)該居中,不要貼在墻上。超聲波是垂直縱波,插入過深不易形成對(duì)流,會(huì)影響粉碎效率。
3、超聲波參數(shù)設(shè)置:設(shè)置超聲波粉碎機(jī)的工作參數(shù)。對(duì)于對(duì)溫度要求敏感的樣品(如細(xì)菌),通常在室外使用冰浴。實(shí)際溫度必須在25度以下,蛋白質(zhì)核酸肯定不會(huì)變性。
(1)時(shí)間:每次超聲波時(shí)間不要超過5秒,間隔時(shí)間要大于等于超聲波時(shí)間,以利于散熱。時(shí)間設(shè)置應(yīng)以超聲時(shí)間短,超聲次數(shù)多為原則,這樣可以延長(zhǎng)超聲機(jī)和探頭的壽命。
?。?)超聲波功率:不能太高,以免樣品飛濺或起泡。如果樣品體積小于10ml,功率應(yīng)在200w以內(nèi)。選擇2mm的超聲波探頭,將面板后面的探頭選擇開關(guān)撥到相應(yīng)的檔位。10-200ml樣品體積的功率為200-400w,選擇6mm的超聲波探頭,將面板后面的喇叭打到相應(yīng)的檔位;容量超過200ml的樣品,功率在300-600w之間。選擇一個(gè)10mm的超聲波探頭,將面板后面的喇叭打到相應(yīng)的檔位。
?。?)容器選擇:選擇與樣品數(shù)量一樣大的燒杯,也有利于樣品在超聲中的對(duì)流,提高粉碎效率。
4、如果樣品放在1.5ml的EP管中,請(qǐng)務(wù)必固定EP管,防止冰浴融化后液面下降,導(dǎo)致無負(fù)載。
5、日常維護(hù):超聲波粉碎機(jī)使用后,用酒精擦洗探頭或用清水進(jìn)行超聲。