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新手如何選擇流氏抗體

閱讀：467發(fā)布時間：2016-5-18

新手如何選擇流氏抗體

 一般情況，我們開始流式實驗時，首先要選擇抗體，必然要涉及到熒光的選擇，盡量使這些熒光的補(bǔ)償值降到zui低。

1，我們需要了解我們用的流式細(xì)胞儀的硬件設(shè)施（激光，濾光片）

2，選擇合適的熒光染料，盡量利用到你的儀器上的所有激光，這樣可以使這些熒光交叉可能性達(dá)到zui小。一般四種顏色或以下的比較好選，常用：FITC,PE,APC,Percp-cy5.5。當(dāng)然還有其他很多種組合 我們也可以用BD或ebioscience上的軟件進(jìn)行選擇界面有點不同，但基本原理就是設(shè)置好你需要集中顏色，用的是哪臺儀器，幾根激光。。。軟件就會自動列出合適的染料。

3，選擇好熒光染料以后，就是將這些染料與你的抗體起來，這就要根據(jù)自己實驗的需要了，有些常用的抗體上可能標(biāo)記有很多種染料，但有些不常用的選擇性就不太多，所以可以先定一些無法選擇的抗體，然后就是根據(jù)表達(dá)量少的標(biāo)記熒光信號強(qiáng)的染料，認(rèn)為重要的抗體標(biāo)記熒光信號強(qiáng)的，常用熒光的強(qiáng)弱如下：PE>APC>PE-CY7>Percy-cy5.5>FITC>APC-CY7。
 4，抗體確定好后，就可以開始預(yù)實驗了：包括樣品的處理，抗體的濃度，時間，這些都需要一定的try。

5，正式開始實驗需要做blank/isotype,單染（兩兩調(diào)補(bǔ)償），復(fù)染（sample）

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