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抗體保存指南

閱讀:629發(fā)布時間:2017-4-10

保存溫度和條件

對于我們的很多抗體而言,分裝成小等份并凍存于 -20℃  或 -80℃ 是zui保存條件。分裝成小等份可zui大程度減少由凍融造成的損傷,以及從單個試劑瓶中多次吸取而引入的污染。小等份只需凍融一次,如有剩余,可將剩余物保存于 4℃ 。 在收到抗體時,在 10,000 × g 下離心 20 秒以沉積截留于試劑瓶螺紋的溶液,并以小等份轉(zhuǎn)移至低蛋白結(jié)合微量離心管中。小等份的量取決于實驗人員在實驗中通常采用的量。小等份應(yīng)不小于10 μl;等份越小,儲液濃度因抗體蒸發(fā)及吸附于保存瓶表面而受到的影響越大。

 

在大多數(shù)情況下,收到抗體時在 4℃下保存一至兩周,然后再冷凍進(jìn)行*保存是可接受的,但也許腹水液是例外,它可能包含蛋白酶,因而應(yīng)該盡快凍存。同樣,遵照數(shù)據(jù)表上的建議是重要的。

 

免責(zé)條款和其它特別條件:

酶偶聯(lián)抗體不應(yīng)凍存,而應(yīng)保存于 4℃. 凍融不僅影響抗體結(jié)合能力,還會降低酶活性。

無論偶聯(lián)至熒光染料、酶還是*,偶聯(lián)抗體都應(yīng)保存于深色試劑瓶中或用金屬箔包裹。暴露于光線中將損害偶聯(lián)物的活性。特別是熒光偶聯(lián)物易受到光漂白影響,在實驗的所有階段都應(yīng)避光。

IgG3 同型抗體具有解凍時形成聚集物的*趨勢,應(yīng)始終保存于 4℃。

 

用*防止污染

為了防止微生物污染,可將*加入抗體制備品中達(dá)到0.02% (w/v). 的終濃度。很多 Abcam 抗體已經(jīng)包含這種防腐劑抗體已經(jīng)包含這種防腐劑,所用濃度范圍為 0.02 至 0.05%。這會標(biāo)示在數(shù)據(jù)表上標(biāo)題為“保存緩沖液”的欄目。

 

不使用*的情形:

如果用抗體染色或處理活細(xì)胞,或如果用抗體進(jìn)行體內(nèi)研究,一定要使用不包含*的制備品。該抗菌劑也對大多數(shù)其它生物具有毒性:它阻斷細(xì)胞色素電子傳遞系統(tǒng)。

 

*會干擾氨基參與的任何偶聯(lián),應(yīng)在偶聯(lián)進(jìn)行前除去。偶聯(lián)后,抗體可保存于*中,除此以外,0.01% 硫汞撒(硫柳汞)不含伯胺,也是可接受的替代物。

 

*可通過透析或凝膠過濾從抗體溶液中除去。IgG 的分子量為 150,000 道爾頓(IgM 為約 600,000);*的分子量為 65 道爾頓。截留分子量為 14,000 道爾頓的微透析裝置可保留抗體同時使疊氮化物向外擴散。在保持于 4℃ 的磁性攪拌器上的燒杯中,每毫升抗體使用至少一升冷 PBS 并攪拌透析裝置 6 小時。更換 PBS 兩次,每次更換攪拌至少 6 小時。如有可能,所有材料都應(yīng)滅菌并且所得的制備物應(yīng)無菌操作。

 

冷凍/融化損傷

重復(fù)冷凍/融化循環(huán)可使抗體變性,導(dǎo)致其形成使抗體結(jié)合能力降低的聚集物。

 

保存于 -20℃ 對于大多數(shù)抗體是適當(dāng)?shù)?;保存?-80℃無明顯優(yōu)勢。冰箱不能為無霜型。 這些冷凍和融化之間的循環(huán)(以減少結(jié)霜)恰恰是應(yīng)該避免的。出于相同原因,抗體試劑瓶應(yīng)置于具有zui小溫度波動的冰箱區(qū)域,例如朝冰箱后部放置而不是置于門架上。

 

有些研究人員加入冷凍保護(hù)劑甘油達(dá)到 50% 的終濃度以防止冷凍/融化損傷;甘油可將凝固點降低至低于 -20℃。雖然這對于很多抗體是可接受的,但是只有一小部分我們提供的抗體測試了在該保存條件下的穩(wěn)定性,并且我們的保證僅適用于按數(shù)據(jù)表上*的方式保存的抗體。不建議將包含甘油的溶液保存于 -80℃,因為該溫度低于甘油的凝固點。請注意甘油可被細(xì)菌污染。如果加入甘油或任何冷凍保護(hù)劑,則應(yīng)當(dāng)小心操作,以得到無菌制備物。

 

應(yīng)避免抗體在稀釋至工作濃度后在 4℃ 下保存超過一天。蛋白質(zhì)在高濃度下保存時一般不易降解,理想的濃度為1mg/ml 或更高。這是在抗體溶液中加入蛋白質(zhì)例如 BSA 作為穩(wěn)定劑的理論基礎(chǔ)。加入的蛋白質(zhì)也有助于減少抗體因結(jié)合于容器壁上而造成的損失。對于打算進(jìn)行偶聯(lián)的抗體而言,由于穩(wěn)定蛋白質(zhì)會與抗體競爭,降低了偶聯(lián)的效率,所以不應(yīng)加入穩(wěn)定蛋白質(zhì)。


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