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上海宸功生物技術(shù)有限公司
中級會(huì)員 | 第10年

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冰凍切片細(xì)胞色素C氧化酶和琥珀酸脫氫酶雙酶活性染色試劑盒

時(shí)間:2016/6/6閱讀:2526
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主要用途

 

冰凍切片細(xì)胞色素C氧化酶和琥珀酸脫氫酶(Combine COX-SH)雙酶活性染色試劑是一種旨在使細(xì)胞色素C催化人工電子供體染料二氨基聯(lián)苯胺的非酶源性自然氧化,形成棕褐色不溶性產(chǎn)物,以及使用合成電子受體四氮唑蘭染料,通過反應(yīng)呈現(xiàn)出藍(lán)色沉淀現(xiàn)象,來分析冰凍組織樣品中細(xì)胞色素氧化酶和琥珀酸脫氫酶雙酶活性的而經(jīng)典的技術(shù)方法。該技術(shù)經(jīng)過精心改良傳統(tǒng)方法、成功實(shí)驗(yàn)證明的。主要適用于冰凍動(dòng)物組織細(xì)胞色素氧化酶琥珀酸脫氫酶活性的定性檢測。適宜于線粒體疾病和肌肉分型的研究。產(chǎn)品嚴(yán)格無菌,即到即用,操作簡捷,性能穩(wěn)定,顯色清晰。

 

技術(shù)背景

 

肌肉組織細(xì)胞中含有氧化酶,包括細(xì)胞色素氧化酶、琥珀酸脫氫酶和NAH四氮唑蘭還原酶(NAH-TR)等,通過組織化學(xué)染色,可以呈現(xiàn)低含量(陰性染色)和高含量(深度染色)線粒體狀況,由此分辨肌纖維類型和識別線粒體肌病(myopathy)。細(xì)胞色素氧化酶(Cytochrome oxiase)是氧化呼吸鏈的酶部分的總稱。其存在于真核生物的細(xì)胞線粒體上,主要通過氧化磷酸化為細(xì)胞提供能量。二氨基聯(lián)苯胺(3,3’-iaminobenziine,AB)是人工電子供體染料,通過與金屬蛋白,例如含鐵蛋白細(xì)胞色素C中的物理性結(jié)合,產(chǎn)生非酶源性自然氧化,同時(shí)提供電子(細(xì)胞色素C作為電子受體)于呼吸鏈的電子傳遞系統(tǒng),由此呈現(xiàn)出顏色變化和沉積,形成棕褐色不溶性產(chǎn)物。在AB自然氧化的同時(shí),產(chǎn)生活性氧,例如過氧化氫,由過氧化氫酶防止其聚集。在大量氧化型AB的存在下,通過細(xì)胞色素氧化酶的作用,亞鐵細(xì)胞色素C被氧化成正鐵細(xì)胞色素C。由此氧化型AB棕褐色不溶性產(chǎn)物被用于檢測組織細(xì)胞中細(xì)胞色素氧化酶的活性。琥珀酸脫氫酶(succinnate ehyrogenase;SH;EC 1.3.99.1)是三羧酸循環(huán)(tricarboxylic aci cycle;TCA)或Krebs循環(huán)中與細(xì)胞線粒體膜相關(guān)的重要元素,位于線粒體內(nèi)膜,參與細(xì)胞呼吸鏈。其功能在于催化琥珀酸(succinate)的氧化反應(yīng),產(chǎn)生延胡索酸(furmarate),通過黃素腺嘌呤二核苷酸(Flavin Aenine inucleotie;FA)傳遞電子。基于琥珀酸脫氫酶的反應(yīng)原理,使用人工電子受體染料硝基藍(lán)四氮唑(Nitro Blue Tetrazolium;NBT),接受來自還原型黃素腺嘌呤二核苷酸(Reuce flavin Aenine inucleotie;FAH2)的電子,而被還原,產(chǎn)生不溶性藍(lán)色或藍(lán)黑色甲暨色素。使用雙酶染色,可以有效地篩選線粒體疾病和進(jìn)行肌纖維分型。 

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