主要用途

冰凍切片細(xì)胞色素C氧化酶和琥珀酸脫氫酶（Combine COX-SH）雙酶活性染色試劑是一種旨在使用細(xì)胞色素C催化人工電子供體染料二氨基聯(lián)苯胺的非酶源性自然氧化，形成棕褐色不溶性產(chǎn)物，以及使用合成電子受體四氮唑蘭染料，通過反應(yīng)呈現(xiàn)出藍(lán)色沉淀現(xiàn)象，來分析冰凍組織樣品中細(xì)胞色素氧化酶和琥珀酸脫氫酶雙酶活性的而經(jīng)典的技術(shù)方法。該技術(shù)經(jīng)過精心改良傳統(tǒng)方法、成功實(shí)驗(yàn)證明的。主要適用于冰凍動(dòng)物組織的細(xì)胞色素氧化酶和琥珀酸脫氫酶活性的定性檢測。適宜于線粒體疾病和肌肉分型的研究。產(chǎn)品嚴(yán)格無菌，即到即用，操作簡捷，性能穩(wěn)定，顯色清晰。

技術(shù)背景

肌肉組織細(xì)胞中含有氧化酶，包括細(xì)胞色素氧化酶、琥珀酸脫氫酶和NAH四氮唑蘭還原酶（NAH-TR）等，通過組織化學(xué)染色，可以呈現(xiàn)低含量（陰性染色）和高含量（深度染色）線粒體狀況，由此分辨肌纖維類型和識別線粒體肌病（myopathy）。細(xì)胞色素氧化酶（Cytochrome oxiase）是氧化呼吸鏈的酶部分的總稱。其存在于真核生物的細(xì)胞線粒體上，主要通過氧化磷酸化為細(xì)胞提供能量。二氨基聯(lián)苯胺（3，3’-iaminobenziine，AB）是人工電子供體染料，通過與金屬蛋白，例如含鐵蛋白細(xì)胞色素C中的物理性結(jié)合，產(chǎn)生非酶源性自然氧化，同時(shí)提供電子（細(xì)胞色素C作為電子受體）于呼吸鏈的電子傳遞系統(tǒng)，由此呈現(xiàn)出顏色變化和沉積，形成棕褐色不溶性產(chǎn)物。在AB自然氧化的同時(shí)，產(chǎn)生活性氧，例如過氧化氫，由過氧化氫酶防止其聚集。在大量氧化型AB的存在下，通過細(xì)胞色素氧化酶的作用，亞鐵細(xì)胞色素C被氧化成正鐵細(xì)胞色素C。由此氧化型AB棕褐色不溶性產(chǎn)物被用于檢測組織細(xì)胞中細(xì)胞色素氧化酶的活性。琥珀酸脫氫酶（succinnate ehyrogenase；SH；EC 1.3.99.1）是三羧酸循環(huán)（tricarboxylic aci cycle；TCA）或Krebs循環(huán)中與細(xì)胞線粒體膜相關(guān)的重要元素，位于線粒體內(nèi)膜，參與細(xì)胞呼吸鏈。其功能在于催化琥珀酸（succinate）的氧化反應(yīng)，產(chǎn)生延胡索酸（furmarate），通過黃素腺嘌呤二核苷酸（Flavin Aenine inucleotie；FA）傳遞電子。基于琥珀酸脫氫酶的反應(yīng)原理，使用人工電子受體染料硝基藍(lán)四氮唑（Nitro Blue Tetrazolium；NBT），接受來自還原型黃素腺嘌呤二核苷酸（Reuce flavin Aenine inucleotie；FAH₂）的電子，而被還原，產(chǎn)生不溶性藍(lán)色或藍(lán)黑色甲暨色素。使用雙酶染色，可以有效地篩選線粒體疾病和進(jìn)行肌纖維分型。