亚洲国产精品二区久久,日本美女后入式午夜视频在线观看,国产污视频在线观看,欧美日韩国产精品中文字幕在线观看

上海宸功生物技術(shù)有限公司
中級(jí)會(huì)員 | 第10年

18918128223

細(xì)胞/組織高爾基體粗提分離試劑盒

時(shí)間:2017/1/18閱讀:1634
分享:

細(xì)胞/組織高爾基體粗提分離試劑盒

產(chǎn)品說(shuō)明書(shū)
主要用途
細(xì)胞/組織高爾基體粗提分離試劑是一種旨在通過(guò)機(jī)械或化學(xué)處理,差速以及等密度離心方法,從動(dòng)物細(xì)胞
或軟組織中分離出完整的高爾基體細(xì)胞器組分的而經(jīng)典的技術(shù)方法。該技術(shù)經(jīng)過(guò)精心研制、成功實(shí)驗(yàn)
證明的。適合于各種動(dòng)物細(xì)胞或組織(人體、老鼠、兔子等)樣品中高爾基體的制備。可以被用于受體循
環(huán)、糖蛋白和脂蛋白合成,以及抗體釋放機(jī)制等研究。產(chǎn)品不含污染性蛋白酶和核酶,即到即用,性能穩(wěn)
定,分離產(chǎn)量高。
技術(shù)背景
高爾基體(Golgi apparatus或Golgi body),又稱(chēng)為高爾基復(fù)合體(Golgi complex),是大多數(shù)真核細(xì)胞的細(xì)
胞器組分,由40至100扁平片層或稱(chēng)為小池(cisternae)堆疊成內(nèi)膜系統(tǒng)(endomembrane system),分成正
側(cè)或內(nèi)側(cè)網(wǎng)絡(luò)(cis-Golgi network)、近內(nèi)中間網(wǎng)絡(luò)(medial-Golgi)、內(nèi)腔網(wǎng)絡(luò)(endo-Golgi)、外側(cè)或反側(cè)網(wǎng)
絡(luò)等(trans-Golgi)細(xì)胞內(nèi)小管(tubules)、囊泡(vesicles)和小池(cisternae/sac)相互連接的網(wǎng)絡(luò)結(jié)構(gòu),
其主要功能在于由內(nèi)側(cè)網(wǎng)絡(luò)接受內(nèi)質(zhì)網(wǎng)囊泡中的蛋白質(zhì)和脂類(lèi)等生物大分子,處理(修飾、分類(lèi))和組裝
后,由外側(cè)網(wǎng)絡(luò)轉(zhuǎn)運(yùn)分泌到目標(biāo)位置。同時(shí)也是合成蛋白聚糖(proteoglycan)和碳水化合物的重要場(chǎng)所。
高爾基體的分離是現(xiàn)代細(xì)胞生物學(xué)研究的常用手段之一:*,通過(guò)機(jī)械或化學(xué)方法破裂組織細(xì)胞;第二,
通過(guò)低速差速離心去除殘?jiān)樾己途薮蠹?xì)胞器;第三,可以通過(guò)等密度離心獲得高爾基體。
產(chǎn)品內(nèi)容
清理液(Reagent A) 毫升
裂解液(Reagent B) 毫升
分離液A(Reagent C) 毫升
分離液B(Reagent D) 毫升
保存液(Reagent E) 毫升
產(chǎn)品說(shuō)明書(shū)1 份
保存方式
保存在4℃冰箱里,有效保證6 月
用戶(hù)自備
HANK 平衡鹽緩沖溶液或PBS 緩沖溶液:用于清理細(xì)胞
胰蛋白酶乙二胺四乙酸混合液:用于細(xì)胞脫離
*細(xì)胞培養(yǎng)液:用于中和胰蛋白酶的細(xì)胞培養(yǎng)基
15 毫升錐形離心管:用于樣品制備的容器
1.5 毫升離心管:用于樣品保存的容器
8 毫升超速離心管:用于超高速離心的容器
2
4℃(微型)臺(tái)式離心機(jī):用于樣品制備
4℃超速離心機(jī):用于樣品制備
DOUNCE 勻漿器:用于裂解組織
平式搖蕩儀:用于混勻
3 號(hào)針筒和18 號(hào)針頭:用于收集樣品
實(shí)驗(yàn)步驟
一、細(xì)胞樣品
1. 準(zhǔn)備5 至10 瓶75cm2 細(xì)胞培養(yǎng)瓶的細(xì)胞(5 X 107),直至細(xì)胞生長(zhǎng)鋪滿(mǎn)整個(gè)培養(yǎng)表面
2. 分別加入10 毫升用戶(hù)自備的HANK 平衡鹽緩沖溶液或PBS 緩沖溶液到每個(gè)細(xì)胞培養(yǎng)瓶,覆蓋培養(yǎng)瓶
表面,然后抽去
3. 重復(fù)實(shí)驗(yàn)步驟2 一次
4. 加入3 毫升用戶(hù)自備的胰蛋白酶乙二胺四乙酸混合液,鋪滿(mǎn)整個(gè)細(xì)胞生長(zhǎng)表面
5. 置入37℃培養(yǎng)箱3 分種
6. 輕輕手擊震動(dòng)培養(yǎng)瓶,使細(xì)胞脫落
7. 分別加入10 毫升用戶(hù)自備的*細(xì)胞培養(yǎng)液
8. 移入一個(gè)50 毫升錐形離心管
9. 放進(jìn)臺(tái)式離心機(jī)離心10 分鐘,速度為200g
10.小心抽去上清液
11.加入xx 毫升預(yù)冷的清理液(Reagent A),混勻細(xì)胞
12.放進(jìn)臺(tái)式離心機(jī)離心10 分鐘,速度為300g
13.小心抽去上清液
14.加入預(yù)冷的xx 毫升裂解液(Reagent B)
15.渦旋震蕩5 秒,充分混勻
16.即刻放入預(yù)冷的DOUNCE 勻漿器
17.在冰槽里用勻漿棒勻化組織(約20 至40 下)(注意:參見(jiàn)注意事項(xiàng)7)
18.將所有組織勻漿物移入15 毫升錐形離心管
19.放進(jìn)4℃臺(tái)式離心機(jī)離心15 分鐘,速度為3000g
20.小心移出上清液到另一個(gè)新的預(yù)冷的15 毫升錐形離心管——
21.放進(jìn)-70℃冰箱里備用或放進(jìn)冰槽里繼續(xù)后續(xù)操作
22.移取xx 毫升的分離液A(Reagent C)到8 毫升超速離心管
23.小心加入xx 毫升的分離液B(Reagent D)在分離液A(Reagent C)的上面,避免震動(dòng)
24.輕輕加入xx 毫升上述高爾基體混勻液在分離液B(Reagent D)的上面,避免震動(dòng)
25.放進(jìn)4℃超速離心機(jī)離心4 小時(shí),速度為100000g
26.小心取出超速離心管:可見(jiàn)樣品和分離液B(Reagent D)交界處棕色或乳黃色樣品帶
27.小心收集高爾基體樣品帶到8 毫升超速離心管(注意:用3 毫升針筒和18 號(hào)針頭,置于樣品帶下緣小
心緩慢抽吸)
28.加入xx 毫升保存液(Reagent E)
29.放進(jìn)4℃超速離心機(jī)離心30 分鐘,速度為100000g
30.小心抽去上清液
31.加入xx 微升保存液(Reagent E),混勻
32.即刻移入到預(yù)冷的1.5 毫升離心管
3
33.放進(jìn)-70℃冰箱里保存
二、組織樣品
1. 手術(shù)取出動(dòng)物組織,避免或去除脂肪組織,秤重以確定1 克組織重量(實(shí)驗(yàn)前使動(dòng)物空腹12 至
24 小時(shí))
2. (選擇步驟)放進(jìn)預(yù)冷的15 毫升錐形離心管
3. (選擇步驟)加入xx 毫升清理液(Reagent A)清洗1 次
4. 即刻用刀片切碎組織
5. 放進(jìn)一個(gè)預(yù)冷的15 毫升錐形離心管
6. 加入預(yù)冷的xx 毫升裂解液(Reagent B)
7. 渦旋震蕩5 秒,充分混勻
8. 即刻放入預(yù)冷的DOUNCE 勻漿器
9. 在冰槽里用勻漿棒勻化組織(約20 至40 下)(注意:參見(jiàn)注意事項(xiàng)7)
10.將所有組織勻漿物移入15 毫升錐形離心管
11.放進(jìn)4℃臺(tái)式離心機(jī)離心15 分鐘,速度為3000g
12.小心移出上清液到另一個(gè)新的預(yù)冷的15 毫升錐形離心管——
13.放進(jìn)-70℃冰箱里備用或放進(jìn)冰槽里繼續(xù)后續(xù)操作
14.移取xx 毫升的分離液A(Reagent C)到8 毫升超速離心管
15.小心加入xx 毫升的分離液B(Reagent D)在分離液A(Reagent C)的上面,避免震動(dòng)
16.輕輕加入xx 毫升上述高爾基體混勻液在分離液B(Reagent D)的上面,避免震動(dòng)
17.放進(jìn)4℃超速離心機(jī)離心4 小時(shí),速度為100000g
18.小心取出超速離心管:可見(jiàn)樣品和分離液B(Reagent D)交界處棕色或乳黃色樣品帶
19.小心收集高爾基體樣品帶到8 毫升超速離心管(注意:用3 毫升針筒和18 號(hào)針頭,置于樣品帶下緣小
心緩慢抽吸)
20.加入xx 毫升保存液(Reagent E)
21.放進(jìn)4℃超速離心機(jī)離心30 分鐘,速度為100000g
22.小心抽去上清液
23.加入xx 微升保存液(Reagent E),混勻
24.即刻移入到預(yù)冷的1.5 毫升離心管
25.放進(jìn)-70℃冰箱里保存
注意事項(xiàng)
1. 本產(chǎn)品為10 次(1 克動(dòng)物組織或5 X 107 細(xì)胞)操作
2. 操作時(shí),須戴手套
3. 操作時(shí),避免污染母液,尤其是裂解液(Reagent B)、分離液A/B(Reagent C/D)和保存液(Reagent
E)
4. 所有操作均須在4℃或以下?tīng)顟B(tài)進(jìn)行
5. 建議使用足夠的樣品量
6. 建議嚴(yán)格控制操作時(shí)間
7. 通常勻化次數(shù)為20 至40 下(或細(xì)胞顆粒群/組織塊狀消失為止)達(dá)到80%的細(xì)胞裂解為理想狀態(tài),但
不同的組織或細(xì)胞類(lèi)型會(huì)存在差異。用戶(hù)可以通過(guò)顯微鏡觀察3 微升勻漿物的細(xì)胞裂解程度:完整細(xì)
胞呈現(xiàn)發(fā)亮的圓環(huán)。低于50%可以增加勻化次數(shù)
4
8. 根據(jù)超速離心管的大小調(diào)整分離液A/B(Reagent C/D)的使用量或在樣品上面加上石蠟油填滿(mǎn)
9. 通常1 克動(dòng)物組織的高爾基體含量為15 微克蛋白
10.本產(chǎn)品所獲得的高爾基體純度和產(chǎn)量zui為理想
11.高爾基體的標(biāo)志蛋白是UDP半乳糖轉(zhuǎn)移酶(UDP-glactosyl transferase);建議使用純化高爾基體UDP半
乳糖轉(zhuǎn)移酶(UDP-glactosyl transferase)活性比色法定量檢測(cè)試劑盒
12.本公司提供系列亞細(xì)胞結(jié)構(gòu)分析試劑產(chǎn)品
質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)
1. 本產(chǎn)品經(jīng)鑒定性能穩(wěn)定
2. 本產(chǎn)品經(jīng)鑒定分離的高爾基體維持正常活性
3. 本產(chǎn)品經(jīng)鑒定不含污染性蛋白酶和核酶

會(huì)員登錄

×

請(qǐng)輸入賬號(hào)

請(qǐng)輸入密碼

=

請(qǐng)輸驗(yàn)證碼

收藏該商鋪

X
該信息已收藏!
標(biāo)簽:
保存成功

(空格分隔,最多3個(gè),單個(gè)標(biāo)簽最多10個(gè)字符)

常用:

提示

X
您的留言已提交成功!我們將在第一時(shí)間回復(fù)您~
撥打電話(huà)
在線(xiàn)留言
麻豆视频一级片在线观看| av中文字幕一区二区精品久久| 操美女干逼调教捆绑视频| 添女人荫道口视频| 日韩欧美视频在线观看不卡| 999久久久国产大美腿| 国产精品人妇一区二区三区| 国产女明星一级毛片| 国产一区二区三区精品片| 最新免费高清无码片| 一级e片在线观看| 日韩精品人妻一区二区免费| 草草久性色av综合av| 欧美精品日韩精品中文字幕| 欧美亚洲综合久久夜夜嗨| 女人被躁到高潮嗷嗷叫小| 黑人大吊性交啪啪啪| 亚洲一区二区女同性恋免费看| 国产黄片在线免费看| 娇嫩的被两根粗大的np| 无码人妻精品一区二区三区蜜桃| 欧美va精品亚洲va精品| 久久久久久久久黄片观看| 日本潘金莲三级bd高清| 亚洲欧美一区二区三区孕妇| 亚洲 欧美 精品 高清| 插女人下面高潮视频| 女人被躁到高潮嗷嗷叫小| 插BB流水水视频| 丁香婷婷色婷婷粗大| 国产精品人妇一区二区三区| 欧美一级免费观看| 操俄罗斯美女bb| 成人区久久精品一区二区| 91偷自产一区二区三区蜜臀| 午夜性福福利视频一区二区三区| A级毛片高清视频| 中文字幕亚洲欧美精品一区二区| 多男用舌头伺候一女| 黑人与日本人妻中文字幕| 99热这里只有精品亚洲|