10072.3 v.A
明膠法大鼠胚胎干細(xì)胞繁殖試劑盒產(chǎn)品說明書
主要用途
明膠法大鼠胚胎干細(xì)胞繁殖試劑是一種旨在通過特殊明膠替代滋養(yǎng)細(xì)胞作為培養(yǎng)表面的包被處理，提供細(xì)
胞的附著生長，促進(jìn)細(xì)胞繁殖，同時體外維護(hù)大鼠胚胎干細(xì)胞的多能性，抑制培養(yǎng)中的胚胎干細(xì)胞的自發(fā)
分化的而經(jīng)典的技術(shù)方法。該技術(shù)經(jīng)過精心研制、成功實驗證明的。其適用于新的大鼠胚胎干細(xì)胞系
的建立、培養(yǎng)已有的胚胎干細(xì)胞系以及無基質(zhì)細(xì)胞的CD34 干細(xì)胞等。產(chǎn)品即到即用，嚴(yán)格無菌、無病毒
和支原體，性能穩(wěn)定，促細(xì)胞生長效應(yīng)，重復(fù)性高，建立標(biāo)準(zhǔn)化體系。
技術(shù)背景
胚胎干細(xì)胞生長在基質(zhì)表面，穩(wěn)定繁殖效應(yīng)明顯。同時，在富含各種營養(yǎng)元素的培養(yǎng)基中，包括精制胎牛
血清，白血病抑制因子，非必需氨基酸、巰基乙醇以及預(yù)防污染的青霉素和鏈霉素等，維持胚胎干細(xì)胞活
性。產(chǎn)品符合美國USDA、FDA 和USP 的規(guī)定。
產(chǎn)品內(nèi)容
包被液（Reagent A） 30 毫升
營養(yǎng)液（Reagent B） 100 毫升
產(chǎn)品說明書1 份
保存方式
保存在4℃冰箱里，有效保證6 月
用戶自備
25cm2 細(xì)胞培養(yǎng)瓶：用于干細(xì)胞培養(yǎng)的容器
微波爐：用于試劑加熱
細(xì)胞培養(yǎng)箱：用于細(xì)胞孵育培養(yǎng)的設(shè)備
實驗提示
1． 準(zhǔn)備1 個25cm2 細(xì)胞培養(yǎng)瓶
2． 取出包被液（Reagent A），擰松瓶蓋（不要打開）
3． 放進(jìn)微波爐加熱（注意：避免溢出）
4． 移取2 毫升包被液（Reagent A）到25cm2 細(xì)胞培養(yǎng)瓶，均勻鋪平
5． 室溫下，靜置30 分鐘
6． 使用無菌吸管，真空抽吸培養(yǎng)瓶里的包被液（Reagent A）
7． 加入1 毫升（5X 105 細(xì)胞）用戶自備的大鼠胚胎干細(xì)胞
8． 加入4 毫升營養(yǎng)液（Reagent B），混勻鋪平
9． 放進(jìn)37℃二氧化碳細(xì)胞培養(yǎng)箱孵育24 小時
10．小心抽去細(xì)胞培養(yǎng)液
11．重復(fù)實驗步驟8 至10 一次
12．傳代前4小時使用2毫升營養(yǎng)液（Reagent B）換液一次，傳代比例為1：1至1：10之間
注意事項
1． 本產(chǎn)品為10 次操作
2． 嚴(yán)格無菌操作
3． 操作時須戴手套
4． 使用時，避免污染母液
5． 用戶根據(jù)需求，可以添加各種生長因子，例如成纖維細(xì)胞生長因子（Fibroblast growth factor；FGF）等
6． 建議每天換液；如果溶液顏色為桔紅色，務(wù)必即刻換液，不要等到溶液顏色為黃色
7． 建議按下表用量使用
培養(yǎng)板/培養(yǎng)皿/培養(yǎng)瓶包被液（Reagent A） 營養(yǎng)液（Reagent B）
6 孔板1.5 毫升3 毫升
30mm 1.5 毫升2 毫升
60mm 3 毫升6 毫升
100mm 6 毫升12 毫升
25cm2 2 毫升4 毫升
75cm2 6 毫升15 毫升
8． 本公司提供系列細(xì)胞培養(yǎng)產(chǎn)品
質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)
1． 產(chǎn)品經(jīng)鑒定性能穩(wěn)定
2． 本產(chǎn)品經(jīng)鑒定無噬菌體、支原體、病毒污染