HL80061.2.2 v.A

特殊石蠟切片中性脂質(zhì)油紅O直接染色試劑盒產(chǎn)品說(shuō)明書

主要用途

特殊石蠟切片中性脂質(zhì)油紅O直接染色試劑是一種旨在使用特殊脫蠟處理和高度脂溶性偶氮染料油性紅O染色技術(shù)，分析石蠟包埋組織切片中（大程度保留的）中性甘油三脂、脂質(zhì)以及脂蛋白等脂質(zhì)狀況的而經(jīng)典的技術(shù)方法。該技術(shù)經(jīng)過(guò)精心改良傳統(tǒng)方法、成功實(shí)驗(yàn)證明的。主要適用于各種人體和動(dòng)物組織石蠟切片的脂質(zhì)檢測(cè)。用于成脂細(xì)胞定性、細(xì)胞病理學(xué)分析（脂質(zhì)細(xì)胞瘤；LIPOID）和識(shí)別（脂肪肉瘤；liposarcoma）等研究。產(chǎn)品即到即用，操作簡(jiǎn)捷，性能穩(wěn)定，著色清晰。

技術(shù)背景

脂類物質(zhì)（LIPIDS）是一類脂溶性（疏水性）的自然分子，包括脂肪酸（FATTY ACID）及其衍生物甘油一脂、二脂、三脂和磷脂，以及其它固醇類（STEROL）物質(zhì)，例如膽固醇。脂類物質(zhì)在機(jī)體中具有能量?jī)?chǔ)存的作用，是膜結(jié)構(gòu)的組成成分和細(xì)胞信號(hào)分子。油性紅O（Oil Red O），又稱為27號(hào)紅色溶劑（Solvent Red 27）或蘇丹紅5B（Sudan Red 5B），是一種脂溶性偶氮染料（LYSOCHROME AZO DYE）。其分子式為C26H24N4O，分子量為408.51。染色顯示脂類物質(zhì)呈紅色。由于石蠟包埋的組織切片在去石蠟的過(guò)程中，有機(jī)溶劑諸如二甲苯等容易破壞和減少組織中的脂質(zhì)成分，因此使用非二甲苯類脫蠟，以大程度保護(hù)組織中的脂質(zhì)成分是油性紅O染色的關(guān)鍵。

產(chǎn)品內(nèi)容

脫蠟液（Reagent A）          50毫升

凈化液（Reagent B）   10毫升

清理液（Reagent C）   50毫升

脫水液（Reagent D）   20毫升

染色液（Reagent E）   10毫升

澄清液（Reagent F）   10毫升

產(chǎn)品說(shuō)明書    1份

保存方式

保存在4℃冰箱里，避免光照；有效保證6月

用戶自備

蘇木素復(fù)染試劑盒（80067）：用于常規(guī)染色后復(fù)染

經(jīng)典水相封片液（12146）：用于染色后封片處理

烘箱：用于石蠟切片處理

中性樹脂：用于切片封片

光學(xué)顯微鏡：用于切片染色后觀察分析

實(shí)驗(yàn)步驟

• 脫蠟處理

• 取出待測(cè)的6微米厚的石蠟包埋的組織切片
• 放進(jìn)80℃烘箱，孵育30分鐘
• 室溫下靜置15分鐘
• 小心加上500微升脫蠟液（Reagent A）在切片上，鋪滿整個(gè)切片樣品表面
• 室溫下孵育5分鐘
• 小心移去切片上的脫蠟液（Reagent A）
• 重復(fù)實(shí)驗(yàn)步驟4至6一次
• 小心加上200微升凈化液（Reagent B）在切片上，鋪滿整個(gè)切片樣品表面
• 室溫下孵育5分鐘
• 小心移去切片上的凈化液（Reagent B）
• 小心加上200微升清理液（Reagent C）在切片上，鋪滿整個(gè)切片樣品表面
• 室溫下孵育3分鐘
• 小心移去切片上的清理液（Reagent C）

• 樣本染色處理

• 小心加上200微升脫水液（Reagent D），覆蓋整個(gè)生長(zhǎng)表面
• 室溫下靜置5分鐘
• 小心抽去脫水液（Reagent D）
• 重復(fù)實(shí)驗(yàn)步驟1至3一次
• 小心加上200微升染色液（Reagent E），覆蓋整個(gè)生長(zhǎng)表面
• 室溫下靜置7分鐘；或直至可見紅色
• 小心抽去染色液（Reagent E）
• 室溫下，小心加上200微升清理液（Reagent C）
• 室溫下孵育2分鐘
• 小心抽去清理液（Reagent C）

三、樣本復(fù)染處理

• 小心加上200微升澄清液（Reagent F），覆蓋整個(gè)生長(zhǎng)表面
• 室溫下孵育5分鐘
• 小心抽去澄清液（Reagent F）
• 小心加入200微升清理液（Reagent C）
• 室溫下孵育2分鐘
• 小心抽去清理液（Reagent C）
• 樣本復(fù)染處理（蘇木素）
• 即刻在一般光學(xué)顯微鏡下觀察：脂類物質(zhì)呈現(xiàn)紅色（如果復(fù)染則細(xì)胞核呈現(xiàn)藍(lán)色）

注意事項(xiàng)

• 本產(chǎn)品為50次操作
• 操作時(shí)，須戴手套
• 建議用戶避免使用常規(guī)石蠟包埋組織切片，即石蠟包埋前避免二甲苯等透明處理
• 染色時(shí)更換試劑溶液時(shí)，保持切片面基本晾干
• 試劑溶液在切片表面時(shí)，避免有氣泡存在，同時(shí)確保鋪滿切片表面
• 整個(gè)操作，在避光狀態(tài)下進(jìn)行
• 樣品染色避免過(guò)度，肉眼可見紅色即可終止染色
• 建議使用蘇木素復(fù)染試劑盒（80067），增加染色對(duì)比度
• 染色完成后，即刻進(jìn)行光學(xué)顯微鏡觀察 
• 樣品染色后保存，避免光照
• 封片處理，避免使用有機(jī)溶劑類包括乙醇等，而使用水相封片液；建議使用經(jīng)典水相封片液（12146）
• 本公司提供系列脂類染色試劑產(chǎn)品

質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)

• 本產(chǎn)品經(jīng)鑒定性能穩(wěn)定
• 本產(chǎn)品經(jīng)鑒定顯色清晰