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丙二醛(MDA)終點(diǎn)比色法定量檢測(cè)試劑盒產(chǎn)品說(shuō)明書(shū)

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丙二醛(MDA)終點(diǎn)比色法定量檢測(cè)試劑盒產(chǎn)品說(shuō)明書(shū) 主要用途 丙二醛(MDA)終點(diǎn)比色法定量檢測(cè)試劑是一種旨在通過(guò)TBARS(硫代巴比妥酸反應(yīng)物)技術(shù),檢測(cè)與之反應(yīng)的丙二醛,其產(chǎn)物丙二醛雙硫代巴比妥酸加合物,在分光光度儀下,檢測(cè)其吸光峰值的變化,即采用比色法測(cè)定樣品中總丙二醛含量的而經(jīng)典的技術(shù)方法。該技術(shù)由大師級(jí)科學(xué)家精心研制、成功實(shí)驗(yàn)證明的。其適用于各種動(dòng)物、人體等細(xì)胞、組織、血液、體液、培養(yǎng)液丙二醛的含量檢測(cè)。廣泛用于細(xì)胞氧化應(yīng)急研究,特別是脂質(zhì)過(guò)氧化的分析。產(chǎn)品嚴(yán)格無(wú)菌,即到即用,操作簡(jiǎn)捷,性能穩(wěn)定,重復(fù)性好。 技術(shù)背景 脂質(zhì)過(guò)氧化反應(yīng)(lipid peroxidation;LPO)是動(dòng)物和植物細(xì)胞損傷的一種機(jī)制,也是評(píng)價(jià)細(xì)胞和組織氧化應(yīng)急的標(biāo)志。含有兩個(gè)或以上雙鍵(double bond)的多不飽和脂肪酸(Polyunsaturated Fatty Acid)對(duì)自由基以及其它活性氧化族高度敏感,導(dǎo)致產(chǎn)生脂質(zhì)過(guò)氧自由基LOO+(lipid peroxyl radical),使脂類(lèi)氧化(lipid oxidation)。脂質(zhì)過(guò)氧化自由基LOO+同時(shí)通過(guò)攻擊分子內(nèi)雙鍵,經(jīng)環(huán)化、裂解形成環(huán)狀內(nèi)過(guò)氧化物(cyclic endoperoxide),例如丙二醛(malondialdehyde;MDA)。作為脂質(zhì)過(guò)氧化性低分子量終端產(chǎn)物之一的丙二醛,廣泛用于脂質(zhì)過(guò)氧化反應(yīng)的指標(biāo)。在丁羥甲苯(Butylated Hydroxytoluene;BHT)和EDTA的參與幫助減少干擾性脂類(lèi)氧化的情況下,丙二醛與硫代巴比妥酸(thiobarbituric acid;TBA)進(jìn)行反應(yīng),產(chǎn)生丙二醛雙硫代巴比妥酸加合物(MDA-TBA2),通過(guò)分光光度儀(532nm波長(zhǎng))來(lái)定量分析丙二醛的含量,其反應(yīng)方式為: malondialdehyde +2 thiobarbituric acid → MDA-TBA2 產(chǎn)品內(nèi)容 抗干擾液(Reagent A) 500微升 萃取液(Reagent B) 1.25毫升 反應(yīng)液(Reagent C) 5管 補(bǔ)充液(Reagent D) 10毫升 稀釋液(Reagent E) 1.5毫升 產(chǎn)品說(shuō)明書(shū) 1份 保存方式 保存在4℃冰箱里,抗干擾液(Reagent A)和反應(yīng)液(Reagent C)避免光照,并密封;萃取液(Reagent B)具有腐蝕性,注意操作安全;有效保證6月 用戶(hù)自備 恒溫培養(yǎng)箱:用于反應(yīng)孵育 酶標(biāo)板:用于比色的容器 酶標(biāo)儀:用于樣品比色分析 實(shí)驗(yàn)步驟 實(shí)驗(yàn)開(kāi)始前,將試劑盒中的反應(yīng)液(Reagent C) 置入冰槽里。移取250微升稀釋液(Reagent E)到 反應(yīng)液(Reagent C)管里,渦旋混勻,標(biāo)記為反應(yīng)工作液(10次操作量)。同時(shí)設(shè)定好酶標(biāo)儀(溫度為25℃):波長(zhǎng)532nm,并置零。然后進(jìn)行下列操作。 1.準(zhǔn)備好1個(gè)96酶標(biāo)板孔,并做好相應(yīng)標(biāo)記:背景對(duì)照和樣品 2.分別移取140微升補(bǔ)充液(Reagent D) 3.分別加入10微升抗干擾液(Reagent A) 4.分別加入50微升補(bǔ)充液(Reagent D)或待測(cè)樣品(注意:總量為1至2毫克總蛋白) 5.用槍頭混勻 6.分別加入25微升萃取液(Reagent B) 7.用槍頭混勻 8.分別加入25微升反應(yīng)工作液 9.輕輕搖動(dòng)酶標(biāo)板,混勻 10.放進(jìn)60℃恒溫培養(yǎng)箱,孵育60分鐘 11.放進(jìn)酶標(biāo)儀檢測(cè) 12.樣品實(shí)際讀數(shù):(樣品讀數(shù)-背景對(duì)照讀數(shù)) 13.計(jì)算樣品總濃度 [樣品實(shí)際讀數(shù)X樣品稀釋倍數(shù)X 0.25(毫升,測(cè)定容量)]÷[0.05(樣品容量,毫升)X 156(毫摩爾吸光系數(shù))X 0.6]=微摩爾/毫升÷(樣品蛋白濃度)毫克/毫升=微摩爾/毫克 注意事項(xiàng) 1.本產(chǎn)品為50次(96孔板)操作 2.操作時(shí),須戴手套 3.萃取液(Reagent B)具有腐蝕性,注意操作安全 4.反應(yīng)液(Reagent C)為固體,避免在室溫下放置;配制后,有效期1周 5.抗干擾液(Reagent A)和反應(yīng)液(Reagent C)避免光照,并密封 6.本產(chǎn)品檢測(cè)敏感度可達(dá)0.05微摩爾丙二醛 7.50微摩爾的過(guò)氧化氫會(huì)干擾檢測(cè)(使丙二醛減少13%);而蔗糖和果糖則不影響檢測(cè) 8.如果樣品含有過(guò)高的蛋白成分,建議進(jìn)行樣品去蛋白處理 9.如果待測(cè)樣品濃度過(guò)高或過(guò)低,可以調(diào)整樣品濃度 10.正常樣品的丙二醛濃度相當(dāng)?shù)?,約在皮摩爾水平,即10至100皮摩爾/毫克蛋白 11.本公司提供系列丙二醛檢測(cè)試劑產(chǎn)品 質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn) 1.本產(chǎn)品經(jīng)鑒定性能穩(wěn)定 2.本產(chǎn)品經(jīng)鑒定檢測(cè)敏感

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