亚洲国产精品二区久久,日本美女后入式午夜视频在线观看,国产污视频在线观看,欧美日韩国产精品中文字幕在线观看

上海宸功生物技術(shù)有限公司
中級會員 | 第10年

18918128223

當(dāng)前位置:首頁   >>   資料下載   >>   乳酸脫氫酶(LDH)釋放法細(xì)胞繁殖與毒性定量檢測試劑盒產(chǎn)品說明書

乳酸脫氫酶(LDH)釋放法細(xì)胞繁殖與毒性定量檢測試劑盒產(chǎn)品說明書

時間:2018-5-9閱讀:1961
分享:
  • 提供商

    上海宸功生物技術(shù)有限公司
  • 資料大小

    148.9KB
  • 資料圖片

  • 下載次數(shù)

    265次
  • 資料類型

    PDF 文件
  • 瀏覽次數(shù)

    1961次
點(diǎn)擊免費(fèi)下載該資料

乳酸脫氫酶(LDH)釋放法細(xì)胞繁殖與毒性定量檢測試劑盒產(chǎn)品說明書

 

主要用途

 

乳酸脫氫酶(LDH)釋放法細(xì)胞繁殖與毒性定量檢測試劑是一種旨在通過酶聯(lián)連續(xù)反應(yīng)系統(tǒng)檢測由于細(xì)胞損傷導(dǎo)致的細(xì)胞內(nèi)穩(wěn)定的乳酸脫氫酶釋放到細(xì)胞外,使四唑鹽染料碘硝基氯化四氮唑INT)還原為紅色甲臜(farmazan,即比色法定量測定酶活性,以評價活體細(xì)胞繁殖的而經(jīng)典的技術(shù)方法。該技術(shù)經(jīng)過精心研制、成功實(shí)驗(yàn)證明的。適用于各種藥物、化學(xué)、環(huán)境因子和營養(yǎng)因子處理的貼壁或懸浮生長中的動物或人體細(xì)胞。替代傳統(tǒng)的同位素[51 Cr]釋放檢測的更佳選擇。產(chǎn)品嚴(yán)格無菌,即到即用,簡捷敏感,性能穩(wěn)定,顯色清晰,檢測準(zhǔn)確,重復(fù)性好。

 

技術(shù)背景

 

細(xì)胞凋亡或壞死而造成的細(xì)胞膜結(jié)構(gòu)的損害或*裂解導(dǎo)致細(xì)胞漿內(nèi)的酶釋放外泄到培養(yǎng)液里,其中包括活性穩(wěn)定的乳酸脫氫酶。乳酸脫氫酶(lactate dehydrogenase;LDH)釋放法的測定是基于在乳酸脫氫酶的作用下,還原NAD+反應(yīng)生成的NADH,再與氧化型2-(4-碘苯)-3-(4-硝基苯)-5-苯四唑(Iodonitrotetrazolium;INT在硫辛酰胺脫氫酶(diaphorase)的催化下反應(yīng)生成紅色生色產(chǎn)物甲formazan),在490nm波長下產(chǎn)生吸收峰,從而確定釋放的乳酸脫氫酶的活性,作為細(xì)胞膜完整性的標(biāo)志:吸光值與細(xì)胞死亡或毒性程度成線性正相關(guān)。酶聯(lián)連續(xù)反應(yīng)系統(tǒng)為:

 

產(chǎn)品內(nèi)容

 

裂解液(Reagent A)      毫升

補(bǔ)充液(Reagent B) 毫升

反應(yīng)液(Reagent C)      毫升

顯色液(Reagent D)      毫升

終止液(Reagent E)      毫升

標(biāo)準(zhǔn)液(Reagent F)     微升(另購)

產(chǎn)品說明書                         1份

 

保存方式

 

保存在-20℃冰箱里,反應(yīng)液(Reagent C)和顯色液(Reagent D)避免光照有效保證6月

 

 

用戶自備

 

96孔細(xì)胞培養(yǎng)板:用于細(xì)胞操作的容器

細(xì)胞培養(yǎng)箱:用于孵育反應(yīng)

孔板離心機(jī):用于沉淀細(xì)胞

酶標(biāo)儀:用于定量檢測染色后的細(xì)胞

 

實(shí)驗(yàn)步驟

 

  • 貼壁細(xì)胞檢測

 

  • 準(zhǔn)備96孔細(xì)胞培養(yǎng)板的待測細(xì)胞(每孔100微升):包括未處理的對照細(xì)胞(樣品對照孔),未處理的后續(xù)裂解的細(xì)胞(樣品zui大酶活性對照孔),以及藥物處理的細(xì)胞(處理樣品孔),并做好標(biāo)記(細(xì)胞密度為每孔2 X 103至2 X 104細(xì)胞)
  • 到規(guī)定的檢測時間點(diǎn)前1小時,從濕潤的細(xì)胞培養(yǎng)箱里取出待測的96孔細(xì)胞培養(yǎng)板(注意:確保細(xì)胞培養(yǎng)液維持在100微升容量
  • 加入xx微升裂解液(Reagent A)到未處理的后續(xù)裂解的細(xì)胞孔里(樣品zui大酶活性對照孔
  • 同時加入xx微升補(bǔ)充液(Reagent B)到其余所有檢測孔里
  • 放回濕潤的細(xì)胞培養(yǎng)箱里,繼續(xù)培養(yǎng)1小時,即規(guī)定檢測時間
  • 從濕潤的細(xì)胞培養(yǎng)箱里取出待測的96孔細(xì)胞培養(yǎng)板
  • 放進(jìn)孔板離心機(jī)離心10分鐘,速度為250g
  • 分別小心移取50微升上清液到新的96孔板的相應(yīng)孔里,避免觸摸細(xì)胞顆粒,同時注意做好標(biāo)記
  • 分別加入xx微升反應(yīng)液(Reagent C)(注意:使用前,須混勻)
  • 分別加入xx微升顯色液(Reagent D) 
  • 搖動96孔板混勻
  • 在室溫下孵育30分鐘,避免光照
  • (選擇步驟)分別加入xx微升終止液(Reagent E)
  • 即刻放進(jìn)酶標(biāo)儀里測讀:波長490nm
  • 計(jì)算處理樣品實(shí)際吸光讀數(shù):處理樣品孔吸光讀數(shù)-樣品對照孔吸光讀數(shù)
  • 計(jì)算樣品細(xì)胞zui大酶活性的實(shí)際吸光讀數(shù):樣品zui大酶活性對照孔吸光讀數(shù)-樣品對照孔吸光讀數(shù)
  • 計(jì)算細(xì)胞毒性或死亡率(%):

 

(處理樣品實(shí)際吸光讀數(shù)÷樣品細(xì)胞zui大酶活性的實(shí)際吸光讀數(shù))X 100

 

  • 或繪制細(xì)胞生長曲線:縱座標(biāo)(Y軸)為實(shí)際吸光讀數(shù)(A);橫坐標(biāo)(X軸)為細(xì)胞數(shù)或時間點(diǎn)或藥物濃度;據(jù)此計(jì)算其LD50

 

  • 懸浮細(xì)胞檢測

 

  • 準(zhǔn)備96孔細(xì)胞培養(yǎng)板的待測懸浮細(xì)胞(每孔100微升):包括未處理的對照細(xì)胞(樣品對照孔),未處理的后續(xù)裂解的細(xì)胞(樣品zui大酶活性對照孔),以及藥物處理的細(xì)胞(處理樣品孔),并做好標(biāo)記(細(xì)胞密度為每孔5 X 103至5 X 104細(xì)胞)
  • 到規(guī)定的檢測時間點(diǎn)前1小時,從濕潤的細(xì)胞培養(yǎng)箱里取出待測的96孔細(xì)胞培養(yǎng)板(注意:確保細(xì)胞培養(yǎng)液維持在100微升容量
  • 加入xx微升裂解液(Reagent A)到未處理的后續(xù)裂解的細(xì)胞孔里(樣品zui大酶活性對照孔
  • 同時加入xx微升補(bǔ)充液(Reagent B)到其余所有檢測孔里
  • 放回濕潤的細(xì)胞培養(yǎng)箱里,繼續(xù)培養(yǎng)1小時,即規(guī)定檢測時間
  • 從濕潤的細(xì)胞培養(yǎng)箱里取出待測的96孔細(xì)胞培養(yǎng)板
  • 放進(jìn)孔板離心機(jī)離心10分鐘,速度為250g
  • 分別小心移取50微升上清液到新的96孔板的相應(yīng)孔里,避免觸摸細(xì)胞顆粒,同時注意做好標(biāo)記
  • 分別加入xx微升反應(yīng)液(Reagent C)(注意:使用前,須混勻)
  • 分別加入xx微升顯色液(Reagent D) 
  • 搖動96孔板混勻
  • 在30℃溫度下孵育30分鐘,避免光照
  • (選擇步驟)分別加入xx微升終止液(Reagent E)
  • 即刻放進(jìn)酶標(biāo)儀里測讀:波長490nm
  • 計(jì)算處理樣品實(shí)際吸光讀數(shù):處理樣品孔吸光讀數(shù)-樣品對照孔吸光讀數(shù)
  • 計(jì)算樣品細(xì)胞zui大酶活性的實(shí)際吸光讀數(shù):樣品zui大酶活性對照孔吸光讀數(shù)-樣品對照孔吸光讀數(shù)
  • 計(jì)算細(xì)胞毒性或死亡率(%):

 

(處理樣品實(shí)際吸光讀數(shù)÷樣品細(xì)胞zui大酶活性的實(shí)際吸光讀數(shù))X 100

 

  • 或繪制細(xì)胞生長曲線:縱座標(biāo)(Y軸)為實(shí)際吸光讀數(shù)(A);橫坐標(biāo)(X軸)為細(xì)胞數(shù)或時間點(diǎn)或藥物濃度;據(jù)此計(jì)算其LD50

 

注意事項(xiàng)

 

  • 本產(chǎn)品為100次(1個96孔板)操作
  • 操作時須戴手套
  • 整個操作須無菌操作
  • 建議每個樣品安排3個孔,即重復(fù)3次,計(jì)算時取其平均值
  • 檢測體系相應(yīng)增加,試劑用量按比例相應(yīng)增加:例如200微升檢測體系,試劑用量增加1倍
  • 每孔中的培養(yǎng)液需100微升,避免使用周邊培養(yǎng)孔(常常液體蒸發(fā)而減少)
  • 系統(tǒng)測試,可以加入10微升標(biāo)準(zhǔn)液(Reagent G)到50微升無細(xì)胞的細(xì)胞培養(yǎng)液里,然后加入反應(yīng)液和顯色液即可
  • 細(xì)胞裂解效果不佳,可以使用20微升裂解液(Reagent A)處理
  • 孵育時,須避光
  • 染色完成后,建議即刻檢測,zui遲不得超過1小時
  • 細(xì)胞培養(yǎng)和處理時,避免使用草酸(OXALATE),草氨酸(OXAMATE)和EDTA,否則影響檢測的準(zhǔn)確性
  • 血清含有乳酸脫氫酶,建議使用濃度不要超過1%
  • 細(xì)胞過度生長、密度過高、離心速度過大、培養(yǎng)箱內(nèi)外溫差過大等因素會造成細(xì)胞自然釋放乳酸脫氫酶
  • 酚紅會干擾檢測
  • 樣品zui大酶活性對照孔或zui大OD吸光讀數(shù)與細(xì)胞裂解程度密切相關(guān)
  • 如果用戶沒有孔板離心機(jī),則移取上清液時格外小心
  • 如果用戶沒有匹配的波長,可以使用波長470nm至570nm之間的任一波長替代
  • 本公司提供系列細(xì)胞繁殖檢測試劑產(chǎn)品

 

質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)

 

  • 本產(chǎn)品經(jīng)鑒定性能穩(wěn)定
  • 本產(chǎn)品經(jīng)鑒定檢測敏感

會員登錄

×

請輸入賬號

請輸入密碼

=

請輸驗(yàn)證碼

收藏該商鋪

X
該信息已收藏!
標(biāo)簽:
保存成功

(空格分隔,最多3個,單個標(biāo)簽最多10個字符)

常用:

提示

X
您的留言已提交成功!我們將在第一時間回復(fù)您~
撥打電話
在線留言
国精品午夜福利视频导航| 无码爆一二三区免费视频| 精品国产Av无码久久久一区二区| 美女日逼视频免费| 色老头av亚洲三区三区| 欧美国产日韩a欧美在线| 大鸡巴抽插小穴色虐视频| 日韩精品无码一区二区三区不卡| 熟妇女人妻丰满中文字幕| aaa无码偷拍亚洲| 视频一区视频二区制服丝袜| 18岁以下禁看美女的胸| 波多野吉衣一区在线观看| 快速了解国产一级a爱片| 差鸡巴没码在线观看| 黄色日女人逼视频| 久久久久久亚洲精品首页| 蜜臀AV无码国产精品尤物| 操的我的逼逼好爽好多水| 大玩具猛插大bb| 男男大鸡巴操小屁眼视频| 97超视频免费在线观看| 日本亚洲欧洲一区二区| 亚洲高清中文字幕一区二区三区| 国产欧美日韩一区二区在线观看| 国产成人亚洲精品在线看| 久久高清中文字幕第一页| 欧美一级淫片免费播放口| 我最爱操女人的骚逼| 美国女人抠插bbb| 一区二区三区中文字幕免费在线| 鸡巴操骚逼视频播放| 国产精品午夜小视频观看| 色男人天堂亚洲男人天堂| 搞段B片黄色全免费看看| 福利国产第一视频| 大鸡扒干美女BB直流水| 美女日逼视频免费| 在线视频观看一区| 日韩高清精品一区有码在线| 爱男爽高潮鸡穴视频|