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羅丹明123 簡易細胞核外形態(tài)染色試劑盒 產(chǎn)品說明書

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羅丹明123 簡易細胞核外形態(tài)染色試劑盒
產(chǎn)品說明書
主要用途
羅丹明123 簡易細胞核外形態(tài)染色試劑是一種旨在通過熒光染料羅丹明123 快速集聚在細胞核周圍的活體
線粒體,呈現(xiàn)黃綠色,用于分析和觀察細胞核外圍形態(tài)的而經(jīng)典的技術方法。該技術經(jīng)過精心研制、
成功實驗證明的。其適用于各種細胞核外或線粒體形態(tài)(動物、人體、植物、昆蟲等)的觀察。產(chǎn)品嚴格
無菌,即到即用,熒光清晰,操作簡捷,性能穩(wěn)定。
技術背景
線粒體是細胞中重要的細胞器,大量存在于代謝旺盛的細胞中,分布在細胞核周圍。線粒體標記熒光探針
羅丹明123(Rhodamine123),是一種膜電位敏感的陽離子熒光染料,可以自由進入細胞,高度選擇性地聚
集在線粒體。在活細胞狀態(tài)下直接染色,借助480nm 或500nm 激發(fā)波長可以清晰看到被染成黃綠色的線狀
或顆粒小體的線粒體,分布在細胞核周圍。
產(chǎn)品內(nèi)容
染色液(Reagent A) 微升
產(chǎn)品說明書1 份
保存方式
保存在-20℃冰箱里,避免光照;有效保證6 月
用戶自備
磷酸緩沖液:用于清洗樣品
微型臺式離心機:用于懸浮細胞的操作
蓋玻片:用于染色后封片
熒光顯微鏡:用于觀察細胞核DNA 染色
實驗步驟
一、貼壁細胞染色
1. 準備1 個細胞培養(yǎng)48 孔板的待測細胞,每孔鋪滿率達70%
2. (注意:可以使用載玻片,載玻片培養(yǎng)皿,35mm 培養(yǎng)皿,和其它培養(yǎng)孔板,見注意事項5)
3. 小心抽去細胞培養(yǎng)液
4. 輕輕沿著孔壁加入500 微升用戶自備的磷酸緩沖鹽溶液(PBS)到細胞培養(yǎng)孔,覆蓋培養(yǎng)孔表面
5. 小心抽去1 毫升磷酸緩沖鹽溶液(PBS)
6. 小心加入100 微升用戶自備的磷酸緩沖鹽溶液(PBS),覆蓋培養(yǎng)孔表面
2
7. 小心加入xx 微升染色液(Reagent A)
8. 輕輕搖動培養(yǎng)板,使其混勻
9. 室溫下孵育60 分鐘,避免光照(或37℃培養(yǎng)箱里孵育15 分鐘)
10.小心抽掉染色液
11.小心加入200 微升用戶自備的磷酸緩沖鹽溶液(PBS),覆蓋培養(yǎng)孔表面
12.即刻在倒置熒光顯微鏡下進行觀察:
二、懸浮細胞染色
1. 將懸浮細胞(1 X 106 細胞)移入到1.5 毫升離心管
2. 放進微型臺式離心機離心10 分鐘,速度為300g(或2000RPM,例如eppendorf 5415)
3. 小心抽掉上清液
4. 加入500 微升用戶自備的磷酸緩沖鹽溶液(PBS),混勻細胞顆粒群
5. 放進微型臺式離心機離心10 分鐘,速度為300g(或2000RPM,例如eppendorf 5415)
6. 小心抽掉上清液
7. 加入100 微升用戶自備的磷酸緩沖鹽溶液(PBS),混勻細胞顆粒群
8. 加入xx 微升染色液(Reagent A),混勻
9. 室溫下孵育60 分鐘,避免光照(或37℃培養(yǎng)箱里孵育15 分鐘)
10.放進微型臺式離心機離心10 分鐘,速度為300g(或2000RPM,例如eppendorf 5415)
11.小心抽掉上清液
12.加入100 微升用戶自備的磷酸緩沖鹽溶液(PBS),混勻細胞顆粒群
13.移出5 微升到載玻片上,放上蓋玻片
14.即刻在熒光顯微鏡下進行觀察:
15.或即刻進行細胞流式儀分析:
注意事項
1. 本產(chǎn)品為100 次操作
2. 本產(chǎn)品友好使用于雙重染色或重疊染色
3. 操作時須戴手套
4. 操作時,避免污染母液
5. 本產(chǎn)品適合各種規(guī)格的培養(yǎng)細胞:載玻片,載玻片培養(yǎng)皿,35mm 培養(yǎng)皿,和各種培養(yǎng)孔板,須相應
調(diào)整試劑溶液:
操作容器試劑溶液規(guī)格
載玻片100 微升
載玻片培養(yǎng)皿100 微升
35mm 培養(yǎng)皿500 微升
96 孔培養(yǎng)板50 微升
48 孔培養(yǎng)板100 微升
24 孔培養(yǎng)板200 微升
12 孔培養(yǎng)板400 微升
6 孔培養(yǎng)板500 微升
25cm2 細胞培養(yǎng)瓶1 毫升
6. 本產(chǎn)品可用于懸浮細胞或細胞脫離處理后染色
7. 如果染色固定后的細胞,室溫下孵育時間15 分鐘
8. 孵育時,須避免光照
9. 建議細胞染色完成后,即刻進行分析,不宜超過2 小時
10.細胞流式儀分析前,須混勻內(nèi)容物
11.細胞流式儀分析,細胞檢測量不得少于10000 個
12.本公司提供系列簡易細胞核染色分析試劑產(chǎn)品
質量標準
1. 本產(chǎn)品經(jīng)鑒定性能穩(wěn)定
2. 本產(chǎn)品經(jīng)鑒定熒光清晰

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