2D電泳樣品提取液VI

英文名：The Extraction Buffer VI and Diluent
儲(chǔ)存：在常溫下運(yùn)輸，干粉 4°C 保存，稀釋液常溫保存,保質(zhì)期兩年。 

規(guī)格：50 ML

2D電泳樣品提取液VI概述：蛋白溶解液是2D電泳的關(guān)鍵因素之一。尿素作為zui普遍的離液劑，廣泛應(yīng)用于蛋白質(zhì)的溶解和變性。但在溶液中，尿素逐漸和氰酸銨達(dá)成一定的平衡，這種趨勢(shì)隨著溫度和pH的增加而增加。異氰酸會(huì)與蛋白質(zhì)的N末端、賴氨酸、精氨酸的氨基以及半胱氨酸的巰基發(fā)生氨甲?；磻?yīng)，并改變蛋白質(zhì)的等電點(diǎn)。因此在進(jìn)行2D電泳樣品提取時(shí)，采用新鮮的以尿素為基礎(chǔ)的2D電泳樣品提取液，具有重要意義。本系列是以干性尿素、其它非離子和兩性去污試劑為基礎(chǔ)，外加一定體積的水化液構(gòu)成的2D電泳樣品提取液。使用前在干緩沖液中加入一定體積的水化液即可制備新鮮的樣品提取液，使用方便，zui大程度保證蛋白不被人為修飾。本系列溶解液對(duì)疏水性蛋白質(zhì)的溶解能力，由弱到強(qiáng)，可以根據(jù)樣品的特性，選擇使用合適的2D電泳樣品提取緩沖液，同時(shí)本系列試劑也可以用于對(duì)IPG Strips的水化。

2D電泳樣品提取液VI使用方法
1. 根據(jù)實(shí)驗(yàn)的樣本數(shù)，稱量出一定克數(shù)的干粉，對(duì)于 Extraction buffer I，II 和 III ，按照每克干粉加入 1.15 ml 的稀釋液；對(duì)于 Extraction buffer IV，V 和 VI，按照每克干粉加入 1.ml 的稀釋液。
2. 根據(jù)實(shí)驗(yàn)的要求，加入一定量的還原試劑，蛋白酶抑制試劑，載體兩性電解質(zhì)，溴酚藍(lán)等。
3. 在渦旋震蕩器上，充分震蕩，直到形成均一，透明的溶液。對(duì)于 Extraction buffer V，需要 30°C，水浴 10 分鐘左右，以促進(jìn)溶解。
4. 對(duì)于沒(méi)有使用完的溶液，請(qǐng)分裝，-70°C 保存，并且盡量在一個(gè)月內(nèi)使用完。
5. 取一支 1.5 ml 的離心管，加入如下的細(xì)胞或組織：100 mg 動(dòng)物組織或 107個(gè)培養(yǎng)的細(xì)胞；經(jīng)過(guò)酶消化去除細(xì)胞壁的 50mg濕重的酵母；50 µl 的昆蟲(chóng)細(xì)胞沉淀；50 mg 細(xì)菌；加入 500 µl 的新鮮的溶解液，經(jīng)過(guò)超聲破碎，每次 30 S ， 5～6次，每次間隔 1 min：或 100 mg 植物組織經(jīng)過(guò)液氮研磨，加入 500 µl 的新鮮的溶解液。將經(jīng)過(guò)以上步驟處理的在離心管中的細(xì)胞或組織震蕩 10 分鐘，室溫 12000 rpm 離心 10 分鐘離心取上清。
6. 沉淀的細(xì)胞碎片或組織可以再加入 50-100 µl 的新鮮的溶解液，震蕩 10 分鐘后，室溫 12000 rpm 離心 10 分鐘后取上清。
7. 合并操作步驟 5-6 中的上清，用于 2D 電泳。

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