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大鼠去甲腎上腺素(NA)ELISA試劑盒●品牌:子科生物ZIKER,美國R&D,美國immonoway,美國sciencell,德國IBL
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自備物品
1.酶標(biāo)儀(盡量提前預(yù)熱)
2.微量加液器、吸頭
3.蒸餾水或去離子水以及濾紙
大鼠去甲腎上腺素(NA)ELISA試劑盒樣本的采集及保存
一般的生物標(biāo)本包括有:
血液、體液、內(nèi)臟器官、糞便、胃液、活檢組織、組織提取液、天然孔分泌物及各種表達(dá)系統(tǒng)的表達(dá)產(chǎn)物等,一般為無菌操作,低溫保存(-80℃、液氮)
一.如果采集的實質(zhì)器官則要求:
1、 器官實質(zhì)不能太小
2、 以采集實質(zhì)性病灶區(qū)為佳:如淋巴結(jié)、心臟、非、肺、脾以及腸管等病毒、病菌聚集的地方為佳
3、 同一病例裝入同一容器,并做好標(biāo)記
4、 應(yīng)在0-8℃的低溫儲存和運輸
5、 實質(zhì)性器官的處理:
5.1、取實質(zhì)性器官約0.5mg左右,充分剪碎或研磨
5.2、加入約500ul的/生鹽水,充分混勻
5.3、離心5000rmp x10min,去上清
5.4、-20℃保存,作為待檢標(biāo)本(切勿反復(fù)凍融)
二.體液(常見的包括血清、血漿、唾液以及尿液等)的處理方式
1、血液包括血漿和血清,它們的主要區(qū)別就是:血清凝血而血漿不凝血,所以它們的處理方式也就不一樣
1.1、采集血漿時一般不加抗凝劑(主要為枸櫞酸鹽和檸檬酸鹽),采集后立即離心800-1000rmp x 5min分離,取上清,-20℃或4℃保存?zhèn)溆茫?br />1.2、如要采集血清,一般要加入總體積1%的抗凝劑,采集后先室溫或4℃靜置半小時后,800-1000rmp x 5min分離,取上清,-20℃或4℃保存?zhèn)溆茫?br />2、胃液和唾液的采集方式一般現(xiàn)采現(xiàn)用,但是一般飯后半小時內(nèi)不易采集,因為剛進食的唾液中富含豐富的唾液淀粉酶,的采集的時間時空腹采集;
3、尿液的采集方式基本和唾液一樣的,即現(xiàn)采現(xiàn)用,但是一般隔夜尿不采集;
4、組織提取液如肺泡灌洗液等,采集后離心分離,800-1000rmp x 5min,取上清,-20℃或4℃保存?zhèn)溆茫?br />三、糞便以及天然孔排泄物:采集后一般現(xiàn)用/生鹽水溶解,充分混勻,800-1000rmp x 5min分離,取上清,-20℃或4℃保存?zhèn)溆茫?br />四、活檢組織一般進行穿刺檢測,zui常見的就是肝活檢,像病毒性肝炎、脂肪肝、各種類型的肝硬化等進行活檢簡單方便、準(zhǔn)確。
五、表達(dá)產(chǎn)物的檢測
(一)真核表達(dá)產(chǎn)物
1、 細(xì)胞上清(分泌性蛋白)
1.2、貼壁細(xì)胞或半貼壁,直接將細(xì)胞培養(yǎng)上清吸出,10000rmp x10min, 取上清,-20℃或4℃保存,作為標(biāo)本進行檢測,如有需要可進行透析或純化處理;
1.2、不貼壁細(xì)胞,將培養(yǎng)基和細(xì)胞轉(zhuǎn)移至10ml離心管,500-800rmp x10min,吸取上清至另一10ml離心管中,10000rmp x10min, -20℃或4℃保存,作為標(biāo)本進行檢測,如有需要可進行透析或純化處理;
2、 細(xì)胞裂解物(非分泌性蛋白)
2.1、貼壁細(xì)胞或半貼壁,直接將細(xì)胞培養(yǎng)上清吸出,然后用001M (pH 7.4)將細(xì)胞吹下至10ml離心管,500-800rmp x10min,棄上清,沉淀轉(zhuǎn)移至1.5ml離心管中, DDW重懸,置冰水浴中用超聲波裂解儀進行裂解,10000rmp x10min,取上清,-20℃或4℃保存,作為標(biāo)本進行檢測,如有需要可進行透析或純化處理;
2.2、不貼壁細(xì)胞,將培養(yǎng)基和細(xì)胞轉(zhuǎn)移至10ml離心管,500-800rmp x10min,棄上清,沉淀移至另一10ml離心管中,0.01M (pH 7.4)重懸,500-800rmp x10min,棄上清,沉淀移至1.5ml離心管中, DDW重懸,置冰水浴中用超聲波裂解儀進行裂解,10000rmp x10min,取上清, -20℃或4℃保存,作為標(biāo)本進行檢測,如有需要可進行透析或純化處理;
(二)原核(大腸桿菌表達(dá)系統(tǒng))表達(dá)產(chǎn)物
1、表達(dá)上清(非融合性蛋白)
直接將培養(yǎng)物和上清吸出,10000rmp x10min, 取上清,-20℃或4℃保存,作為標(biāo)本進行檢測,如有需要可進行透析或純化處理;
2、菌體裂解物(融合性蛋白)
直接將培養(yǎng)物和上清吸出,10000rmp x10min,棄上清,沉淀用洗一遍,500-800rmp x10min,棄上清,DDW重懸沉淀,冰水浴中用超聲波裂解儀進行裂解,10000rmp x10min,取上清,-20℃或4℃保存,作為標(biāo)本進行檢測,如有需要可進行透析或純化處理;
注意事項
1.試劑準(zhǔn)備:所有試劑都必須在使用前達(dá)到室溫,使用后請立即按照說明書要求保存。實驗操作中必須使用一次性吸頭,避免交叉污染。
2.加樣:加樣時,要控制加樣速度,避免*孔與zui后一孔之見的時間間隔過大,否則將會導(dǎo)致不同的預(yù)孵育時間,從而影響實驗的準(zhǔn)確性以及重復(fù)性;一般加樣時間控制在10分鐘內(nèi),如果樣本數(shù)量過多,可使用多道移液器。
3.孵育:樣品要在密閉的容器內(nèi)進行孵育,嚴(yán)格按照說明書上規(guī)定的孵育時間和溫度進行。
4.洗滌:洗滌過程中反應(yīng)孔中的殘留的洗滌液應(yīng)在濾紙上充分拍干,同時要消除板底殘留的液體和手指痕跡,避免影響zui后的酶標(biāo)儀讀數(shù)。
5.反應(yīng)時間的控制:加入底物后請定時觀察反應(yīng)孔的顏色變化(比如,10分鐘左右),如果顏色較深,請?zhí)崆凹尤虢K止液終止反應(yīng)。
6.建議實驗前預(yù)測樣品含量,如樣品濃度過高,應(yīng)對樣品進行稀釋,計算結(jié)果時乘以相應(yīng)的稀釋倍數(shù)。
7.建議使用本試劑盒時先做預(yù)實驗(即先做標(biāo)準(zhǔn)曲線,試用幾個標(biāo)本),如果對本試劑盒有任何疑問,可和所購經(jīng)銷商,如果因運輸過程導(dǎo)致試劑盒失效,可要求調(diào)換,但概不承擔(dān)產(chǎn)品本身以外的任何損失。
zkp0381 Adipo R2(adiponectin receptor 2) 脂聯(lián)素受體-2(抗原)
zkp0382 P-selectin P選擇素抗原
zkp0383 S-100A1 (S100 calcium-binding protein A1) 鈣結(jié)合蛋白S100A1抗原
zkp0384 SLC34A2/NaPi-2b(Solute carrier family 34 member 2) 磷酸鈉協(xié)同轉(zhuǎn)運蛋白抗原zkp0385 Somatostatin/GRIH 生長抑素抗原
zkp0386 Sox2 胚胎干細(xì)胞關(guān)鍵蛋白
zkp0387 P-Tau protein 磷酸化微管相關(guān)蛋白
zkp0388 TDP-43/TARDBP (tar DNA binding protein) Tar DNA 結(jié)合蛋白43抗原
zkp0389 TTF-1 (Thyroid Transcription Factor-1) 甲狀腺核轉(zhuǎn)錄因子-1抗原
zkp0390 Ag-AZIKER(ARG3.1/AZIKER, Activity-regulated cytoskeleton-associated protein) AZIKER(多肽抗原)
zkp0391 Angiotensin II receptor(AngⅡ) 血管緊張素Ⅱ受體(抗原)
zkp0392 AhDMT 1 植物蛋白大豆、花生AhDMT-1(抗原)
zkp0393 Akt/PKC(Protein Kinase C,PKC) 蛋白激酶C(抗原)
zkp0394 ADM/AM Protein (Adrenomedullin) 腎上腺髓質(zhì)素(1-52)
zkp0395 β1-adrenergic receptor 腎上腺素能受體β1(抗原)
zkp0396 Annexin V 膜粘連蛋白-5(抗原)
zkp0397 AQP4(aquaporin Protein-4) 水通道蛋白-4(抗原)
zkp0398 B7-H4 B7-H4(抗原)
zkp0399 ZIKERDH2 (Betaine-aldehyde dehydrogenase ) ZIKERDH2抗原
zkp0400 BGP(Bone Gla-protein) 骨鈣素(抗原)
zkp0401 BK channel (stretch-activated Kca channel) BK通道蛋白(抗原)
zkp0402 BKCa channels(calcium-activated potassium channel) 鈣激活鉀通道蛋白
zkp0403 BTG2/TIS21(B-cell translocation gene 2) BTG2(抗原)
zkp0404 C-fos(i mmediate early gene, ieg) 即刻早期基因(是一種原癌基因)抗原
zkp0405 C-juP-1 (Oncoprotein C-jun:active protein 1) 原癌基因蛋白(活化蛋白1)(抗原)
zkp0406 cyclin D1 周期素D1(抗原)
zkp0407 CB12-327(RP-379C10.2) 新發(fā)現(xiàn)的大腸癌標(biāo)志物(多肽抗原)
zkp0408 Beta-casein(β-casein) β-酪蛋白(抗原)
zkp0409 CCK8 (Cholecystokinin-8) 膽囊收縮素/縮膽囊素(八肽)
zkp0410 CD3 epsilon CD3 epsilon(抗原)
zkp0411 CD4 CD4(抗原)