應(yīng)用: ? 純化與蛋白 A 或蛋白 G 瓊脂糖結(jié)合能力較差的單克隆和多克隆抗體 ? 從添加牛血清的培養(yǎng)物上清液中純化單克隆抗體 ? 蛋白 L 免疫沉淀和免疫共沉淀試驗 ? 純化 ScFv 和含 κ 輕鏈的 Fab 片段
蛋白 L 是一種源自大消化鏈球菌這種細(xì)菌的免疫球蛋白結(jié)合蛋白 (36kDa),但現(xiàn)可通過重組法在大腸桿菌中生產(chǎn)。與主要通過免疫球蛋白 Fc 區(qū)(例如:重鏈)結(jié)合的蛋白 A 和蛋白 G 不同,蛋白 L 通過與輕鏈反應(yīng)來結(jié)合免疫球蛋白。由于結(jié)合反應(yīng)無需依靠重鏈的任何部分參與,因此與蛋白 A 和 G 相比,蛋白 L 能夠結(jié)合更廣泛的免疫球蛋白類型。蛋白 L 可與免疫球蛋白的所有代表類型相結(jié)合,包括 IgG、IgM、IgA、IgE 和 IgD。單鏈可變片段 (ScFv) 和 Fab 片段也可與蛋白 L 結(jié)合。
雖然蛋白 L 能夠廣泛結(jié)合多種 Ig 類型,但它并不是通用的免疫球蛋白結(jié)合蛋白。蛋白 L 僅能與含有 κ 輕鏈(即 VL 結(jié)構(gòu)域的 κ 鏈)的免疫球蛋白結(jié)合。人和小鼠的免疫球蛋白以 κ 輕鏈為主。其他免疫球蛋白則以 λ 輕鏈為主。此外,蛋白 L 僅能有效結(jié)合某些亞型的 κ 輕鏈。例如,它能夠結(jié)合人類的 VkI、VkIII 和 VkIV 亞型,但無法與 VkII 亞型結(jié)合。小鼠免疫球蛋白的結(jié)合局限于具有 VkI 輕鏈的蛋白。
鑒于這些特定的有效結(jié)合要求,固定化蛋白 L 的主要應(yīng)用是從腹水或培養(yǎng)物上清液中純化已知具有 κ 輕鏈的單克隆抗體。蛋白 L 對于純化培養(yǎng)物上清液中含有 VLk 的單克隆抗體非常有效,因為它不會結(jié)合存在于培養(yǎng)基血清補充液中的牛免疫球蛋白。此外,蛋白 L 不會干擾抗體的抗原結(jié)合位點,使其可用于免疫沉淀試驗,即使使用 IgM 也是如此。
Pierce 蛋白 L 瓊脂糖使用 Thermo Scientific AminoLink 偶聯(lián)化學(xué)方法制備而成,與傳統(tǒng)配體固定方法相比具有多種優(yōu)勢。AminoLink 固定后,瓊脂糖珠的糖單體與蛋白 A 上的天然賴氨酸殘基通過簡單的酰胺鍵結(jié)合。與典型的溴化氰 (CNBr) 固定法不同,AminoLink 方法不引入任何新的化學(xué)基團,從而避免了可能導(dǎo)致的非特異性結(jié)合,并且形成基本不可逆的穩(wěn)定結(jié)合。所得的高結(jié)合容量樹脂在多輪抗體純化之后仍然能保留功能性固定化蛋白 L。
Pierce 蛋白 L 瓊脂糖是一種多功能親和樹脂,用于純化包含特定 κ 輕鏈的哺乳動物 IgG 同種型。蛋白 L 特別適用于分離小鼠 IgG VkI 以及人 IgG VkI、VkIII 和 VkIV 的單克隆抗體。