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實(shí)驗(yàn)室細(xì)胞收集的具體方法步驟

閱讀：2054發(fā)布時(shí)間：2016-11-10

　　實(shí)驗(yàn)室細(xì)胞收集的具體方法步驟,實(shí)驗(yàn)室收集細(xì)胞，對(duì)于細(xì)胞的研究極為重要，如何收集細(xì)胞成為實(shí)驗(yàn)室的必做項(xiàng)目之一，那么下面金益柏的博士就帶大家一起來(lái)了解下以下三種方法：
　　WB收集細(xì)胞：
 

　　將細(xì)胞培養(yǎng)基棄掉，用PBS清洗兩次，使用*消化細(xì)胞或細(xì)胞刮，將細(xì)胞懸濁液離心1000rpm/5min，棄上清，保留底層細(xì)胞。如要裂解細(xì)胞6孔板（99ulRIPA+1ulPMSF）,細(xì)胞培養(yǎng)皿（198ulRIPA+2ulPMSF），若要做磷酸化蛋白則加如1ul抑制磷酸化蛋白降解抑制劑，加入細(xì)胞裂解液后用移液器將細(xì)胞吹勻，冰上靜置5min，離心4℃ 12500g/5min，吸取上清液，置于-80℃冰箱；若不裂解細(xì)胞，將細(xì)胞置于-80℃冰箱。


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　　普通PCR收集細(xì)胞：
　　將細(xì)胞培養(yǎng)基棄掉，用PBS清洗兩次，使用*消化細(xì)胞或細(xì)胞刮，將細(xì)胞懸濁液離心1000rpm/5min，棄上清，保留底層細(xì)胞。將細(xì)胞置于-20℃冰箱。
　　qRT-PCR收集細(xì)胞：
　　將細(xì)胞培養(yǎng)基棄掉，用PBS清洗兩次，使用*消化細(xì)胞或細(xì)胞刮，將細(xì)胞懸濁液離心1000rpm/5min，棄上清，保留底層細(xì)胞。加入1ml TRIZOL,置于-80℃冰箱。（注意：本實(shí)驗(yàn)需使用耗材和試劑都為無(wú)RNA酶，PBS必須高壓，離心管和槍頭必須無(wú)酶


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