一、服務(wù)介紹
數(shù)字PCR即Digital PCR（dPCR)，是繼一代普通PCR、二代熒光定量PCR之后的第三代PCR技術(shù)。相較于qPCR，數(shù)字PCR可直接數(shù)出DNA分子的個(gè)數(shù)，可以對(duì)起始樣品定量，是一種全新的核酸分子定量技術(shù)。
dPCR與qPCR方法相比，本方法無(wú)需核酸標(biāo)準(zhǔn)品，定量的結(jié)果不再依賴于 Ct 值；又兼具qPCR方法的優(yōu)點(diǎn)，且結(jié)果的度、準(zhǔn)確性和靈敏度更佳。因此特別適用于依靠Ct值不能很好分辨的應(yīng)用領(lǐng)域：拷貝數(shù)變異、突變檢測(cè)、基因相對(duì)表達(dá)研究（如等位基因不平衡表達(dá)）、二代測(cè)序結(jié)果驗(yàn)證、miRNA表達(dá)分析、單細(xì)胞基因表達(dá)分析等，在環(huán)境微生物和病原體基因的檢測(cè)、遺傳病、無(wú)創(chuàng)*、NGS數(shù)據(jù)驗(yàn)證等方面將具有更廣闊的應(yīng)用前景。
二、實(shí)驗(yàn)原理
通過(guò)把稀釋到一定濃度的DNA分子分布在一定數(shù)目的微滴中，使大部分微滴中的DNA分子數(shù)目為1或0，然后通過(guò)PCR擴(kuò)增和熒光信號(hào)的累計(jì)讀取陽(yáng)性微滴數(shù)目，有熒光信號(hào)的微滴判讀為1；沒(méi)有熒光信號(hào)的微滴判讀為0，再根據(jù)泊松分布計(jì)算出樣本中的DNA分子數(shù)。
三、服務(wù)流程
1、樣品DNA（或RNA）提取及模板制備
2、引物探針設(shè)計(jì)合成
3、PCR擴(kuò)增
4、檢測(cè)微滴
5、分析數(shù)據(jù)、顯示結(jié)果
四、客戶提供
樣本（DNA,RNA,血液，組織，石蠟切片等），樣本的物種信息，基因信息（NCBI登錄號(hào)）；探針選擇Taqman還是MGB
血液樣品：樣品為EDTA抗凝或枸椽酸鈉抗凝，樣品量大于0.5 mL，樣品采集后于-20°C或-80°C保存，低溫（≤-4°C）運(yùn)輸。
組織樣品：樣品可以為新鮮組織（-80°C保存）或石蠟包埋的組織，也可以是95%乙醇中固定的組織，組織量大于100 mg。組織樣品用干冰運(yùn)輸。
DNA樣品：純度OD260/280 比值為 1.6-1.8，濃度≥10 ng/μL，體積≥20 μL。
RNA樣品：純度OD260/280 比值為 1.8-2.0，濃度≥20 ng/μL，體積≥20 μL。需要干冰運(yùn)輸。
五、交付內(nèi)容
實(shí)驗(yàn)報(bào)告：包括實(shí)驗(yàn)方法、步驟、所用試劑、儀器、照片及相關(guān)分析數(shù)據(jù)等。
周期：1個(gè)月左右
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