對于ELISA實(shí)驗(yàn)，科研人員zui怕的就是有誤差，我們能做的就是在可控的范圍內(nèi)，減少ELISA實(shí)驗(yàn)誤差，才是實(shí)驗(yàn)要點(diǎn)。在ELISA實(shí)驗(yàn)操作中，誤差有誤差，一個個小小的誤差導(dǎo)致zui終實(shí)驗(yàn)存在*的數(shù)據(jù)差距，那么如何縮小實(shí)驗(yàn)誤差？下面隨著金益柏一起來看看需要注意的：
ELISA實(shí)驗(yàn)成功與否關(guān)鍵在于減少實(shí)驗(yàn)誤差
1、科研工作者應(yīng)該具備從事實(shí)驗(yàn)室操作的實(shí)驗(yàn)經(jīng)驗(yàn)和操作經(jīng)驗(yàn)，對于實(shí)驗(yàn)儀器、器械都很熟悉，而且具備總結(jié)和分析問題的能力，能夠及時(shí)處理實(shí)驗(yàn)過程中出現(xiàn)的意外。
2、使用校對過的微量移液器，排除因?yàn)樵O(shè)置錯誤導(dǎo)致的誤差。
3、仔細(xì)閱讀elisa說明書，嚴(yán)格按照說明書來操作，不要混用不同批號的試劑，對于不能確定的，需要反復(fù)實(shí)驗(yàn)并總結(jié)進(jìn)行改進(jìn)。
4、洗滌*，洗滌不干凈，會導(dǎo)致假陽性，洗滌液也要新鮮，要現(xiàn)配，陳舊的洗滌液會出現(xiàn)本底增高現(xiàn)象，也可以出現(xiàn)假陽性。
5、嚴(yán)格控制反應(yīng)時(shí)間，反應(yīng)時(shí)間比較長，酶失去活性；反應(yīng)時(shí)間短的話，酶結(jié)合物不能和血清中的微生物抗原抗體充分結(jié)合，生成物機(jī)構(gòu)松散不牢固，容易洗掉，都可以造成假陰性。
6、注意試劑盒的保存期，過期的試劑盒不能使用。
7、評估試劑的實(shí)用性，試劑是否穩(wěn)定，準(zhǔn)確率高低很重要，在試劑啟用前，應(yīng)該對陰、陽對照品反復(fù)對照實(shí)驗(yàn)，判定試劑符合要求后才能使用。
8、嚴(yán)格掌握顯色時(shí)間，顯色時(shí)間短的話，加入終止液反應(yīng)終止后，底物結(jié)合物量過少，容易出現(xiàn)假陰性。超過顯色要求時(shí)間后顯色，應(yīng)判定為假陽性，這可能和試劑有關(guān)系，加顯色后立即顯色，不可報(bào)陽性，這可能是本底顯色的結(jié)果。
9、加樣需要準(zhǔn)確快速，如果加樣不準(zhǔn)確，酶生成的量不能確定，直接影響顯色結(jié)果。顯色的深淺及A值的測定與加入顯色劑和終止液的量有關(guān)，所以加樣應(yīng)慎重。要求在一定時(shí)間內(nèi)加樣完畢的實(shí)驗(yàn)，如果加樣遲緩，便出現(xiàn)誤差，而且試劑長時(shí)間暴露在外，尤其室溫過高時(shí)，保存期會縮短甚至失效。
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