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武漢艾美捷科技有限公司
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閱讀：1177發(fā)布時間：2020-8-4
一 、什么是熒光素酶報告基因？
報告基因（Reporter Gene）：通常指可編碼某種蛋白或酶，其表達(dá)產(chǎn)物容易被檢測，并且能與內(nèi)源性背景蛋白相區(qū)別的基因，通過它的表達(dá)產(chǎn)物來標(biāo)定目的基因的表達(dá)調(diào)控。
而理想的報告基因必須具備以下幾個條件：
1.編碼的表達(dá)產(chǎn)物必須與細(xì)胞內(nèi)源性的所有基因相區(qū)別，編碼產(chǎn)物的活性不受宿主細(xì)胞的干預(yù)。
2.有快速簡便、經(jīng)濟、靈敏的檢測方法，且重現(xiàn)性好、結(jié)果可靠，測量數(shù)據(jù)應(yīng)該有較寬的線性范圍。
3.細(xì)胞內(nèi)的其他基因產(chǎn)物不會干擾報告基因產(chǎn)物的檢測，同時報告基因的表達(dá)也不改變宿主細(xì)胞的生理功能。
常用的報告基因有：
*乙酰轉(zhuǎn)移酶 （CAT），*乙酰轉(zhuǎn)移酶 （CAT），人生長激素（hGH），分泌型堿性磷酸酶（SEAP），熒光素酶（Luciferase），熒光蛋白。今天我們就來說說熒光素酶報告基因。
熒光素酶（Luciferase）是自然界中能發(fā)出熒光的酶的統(tǒng)稱。他們可以通過酶促反應(yīng)催化底物產(chǎn)生自發(fā)熒光。熒光素酶因其便于檢測和靈敏度高等特性常做為報告基因被廣泛用于生化檢測實驗中。
其中應(yīng)用廣泛的是螢火蟲熒光素酶（Firefly luciferase ）和海腎熒光素酶（Renilla luciferase），兩者可分別催化各自的底物發(fā)出不同顏色的熒光，且兩種光吸收波長不同，檢測互不干擾，因此可在同一個化學(xué)反應(yīng)體系中同時使用，由此雙熒光素酶報告基因系統(tǒng)受到廣泛青睞。
二 如何選擇熒光素酶產(chǎn)品？
我們知道有單熒光素酶報告基因和雙熒光素酶報告基因，我們就需要根據(jù)自己的實驗需要構(gòu)建載體，首先我們需要了解自己到底要做什么？清楚的知道我們的實驗設(shè)計方案和目的。一般來說，雙熒光素酶體系應(yīng)用于：
（1）監(jiān)測細(xì)胞數(shù)量（實驗前&實驗后，例如細(xì)胞毒性的影響）
（2）評估轉(zhuǎn)染效率，消除組間轉(zhuǎn)染效率的影響
（3）分析實驗結(jié)果的特異性
（4）穩(wěn)定細(xì)胞系實驗中需檢測不同因子對穩(wěn)定細(xì)胞系的影響，用對照（雙熒光素酶體系）去檢測可能的細(xì)胞毒性以及對特異性的影響
單熒光素酶系統(tǒng)則適用于：
（1）同一實驗組進(jìn)行多次檢測分析（活細(xì)胞中監(jiān)測時間曲線動態(tài)分析）
（2）穩(wěn)定細(xì)胞系，轉(zhuǎn)染/轉(zhuǎn)導(dǎo)效率在穩(wěn)定細(xì)胞系中并不非常重要
1.雙熒光素酶報告載體：#ZX001
Luc-Pair™ Duo-Luciferase HS Assay Kit 是一款高靈敏性雙熒光素酶檢測試劑盒，可高效、快速檢測螢火蟲（ Firefly luciferase ，F(xiàn)Luc）和海腎（Renilla luciferase ，Rluc）熒光素酶的活性。由于其具有*的靈敏度， 可檢測極低水平表達(dá)、調(diào)控和轉(zhuǎn)染不佳的細(xì)胞的表達(dá)，也可搭配微孔板使用。
2.堿性磷酸酶SEAP報告基因載體：#ZX101
Secrete-Pair™ Dual Luminescence Assay Kit用于檢測雙報告系統(tǒng)中Gaussia Luciferase (GLuc)和Secreted Alkaline Phosphatase (SEAP)的活性。GLuc和SEAP都是分泌型蛋白，無需裂解細(xì)胞就能從培養(yǎng)基中獲得實驗樣本。
3.Luc-Pair螢火蟲熒光素酶HS檢測試劑盒：#LF007
Luc-Pair™ Firefly Luciferase HS Assay Kit 是一款高靈敏性熒光素酶檢測試劑盒，可高效、快速檢測螢火蟲（Firefly luciferase，F(xiàn)Luc）熒光素酶的活性。由于其具有*的靈敏度，可檢測極低水平表達(dá)、調(diào)控和轉(zhuǎn)染不佳的細(xì)胞的表達(dá)，也可搭配微孔板使用。適用于 GeneCopoeia 及 Promega 的螢火蟲熒光素酶表達(dá)載體。
4.Luc-Pair二重螢光素酶HT檢測試劑盒：#LF013
The Luc-Pair™ Duo-Luciferase HT Assay Kit是一款穩(wěn)定的適用于高通量分析的雙熒光素酶檢測試劑盒，提供的試劑可直接用于培養(yǎng)基中的細(xì)胞，無需預(yù)處理或預(yù)裂解細(xì)胞，能夠快速簡便地檢測螢火蟲（ Firefly luciferase ，F(xiàn)Luc）和海腎（Renilla luciferase ，Rluc）熒光素酶的活性。
5.對高斯熒光素酶測定試劑盒：#LF061
Secrete-Pair™ Dual Luminescence Assay Kit用于檢測雙報告系統(tǒng)中Gaussia Luciferase (GLuc)和Secreted Alkaline Phosphatase (SEAP)的活性。GLuc和SEAP都是分泌型蛋白，無需裂解細(xì)胞就能從培養(yǎng)基中獲得實驗樣本。
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