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ELISA實驗標曲做不好是什么原因

閱讀:194發(fā)布時間:2017-9-20

  ELISA實驗標曲做不好是什么原因,孫老師在金益柏購買了elisa試劑盒,因為剛接觸elisa實驗,還是屬于新手,研究大鼠干擾素相關(guān)指標的實驗,做完大鼠γ干擾素ELISA實驗后反應標準曲線的梯度都不好。剛加完顯色劑的時候梯度還算明顯,但是顯色比較淺,隨著時間延長(大概6、7分鐘)以后梯度就不明顯了。終止反應后測得的值梯度就沒有了。


  ELISA實驗標曲做不好是什么原因:


  1、剛加完顯色劑時梯度明顯:顯色液可能是從高濃度向低濃度孔加的。


  2、酶濃度太高,導致zui后顯色結(jié)果都是高的


  3、包被-酶標系統(tǒng)不匹配或者酶標的非特異反應太強,或者酶標儀讀數(shù)范圍不夠,


  4、樣本中有能夠催化底物的物質(zhì),沒洗下來。


  5、建議:包被、酶標重新做梯度,先用較低的濃度把梯度摸索好,然后再優(yōu)化靈敏度,zui后調(diào)出所需的靈敏度、線性范圍


  6、有條件的話,可以把酶免的蛋白系統(tǒng)移植到板式化學發(fā)光上,加完底物三分鐘讀數(shù)。


  7、蛋白系統(tǒng)靈敏度夠的話,顯色十分鐘就差不多了。


  8、酶是自己標的這種情況的,HRP比例不要太高。


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