【中國儀器網(wǎng) 維修保養(yǎng)】色譜作為一種分離技術(shù)與方法，自本世紀(jì)初起已經(jīng)有100多年的歷史了，現(xiàn)在已經(jīng)成為分析化學(xué)學(xué)科中的一個(gè)重要的分支。在人類進(jìn)入新時(shí)代之際，人們面臨著在信息科學(xué)、生命科學(xué)、材料科學(xué)、環(huán)境科學(xué)等領(lǐng)域的快速發(fā)展的挑戰(zhàn)，在這些領(lǐng)域人才的需求成為國家高度發(fā)展的至關(guān)重要的因素。而色譜技術(shù)是生命科學(xué)、材料科學(xué)、環(huán)境科學(xué)的手段和工具。根據(jù)近的統(tǒng)計(jì)在各類分析儀器中氣象色譜儀和液相色譜儀的營銷總額占25%-30%。 科學(xué)技術(shù)的發(fā)展，使得色譜技術(shù)也得到進(jìn)一步的發(fā)展，不斷有新的聯(lián)用的技術(shù)得到應(yīng)用。生物醫(yī)學(xué)的發(fā)展，也不斷要求高靈敏和高選擇性的方法對(duì)研究的對(duì)象進(jìn)行定性和定量的研究?！ ? 色譜柱的相關(guān)性質(zhì) 1.1 色譜柱的定義：裝填有固定相用以分離混合組分的柱管。多為金屬或玻璃制作。有直管形、盤管形、U形管等形狀?！ ?.2 分類：色譜柱可分為填充柱和開管柱兩大類。液相色譜通常均采用填充柱。色譜柱的分離效果取決于所選擇的固定相，以及色譜柱的制備和操作條件。簡單而言：常見的分配住填料：碳十八柱(ODS/C18)、碳八柱(Octy了/C8)、碳六柱(Hexyl/C6)、碳四柱(Butyl/C4)、碳一注(Methyl/C1)、陰離子交換柱(SAX)、陽離子交換柱(SCX)、苯基柱(Phenyl)、氨基柱(Amino/NH2)、氰基柱(Cyano/CN/Nitrile)。常見的吸附柱填料：硅膠柱。 色譜柱的選擇會(huì)直接影響混合物中組分的分離。舉例來講：對(duì)于填充柱而言，可選擇的固定相較多，柱容量較大，但是受柱長的限制，分離能力有限，主要應(yīng)用于簡單化合物的分離?！ ? 色譜柱的維護(hù)與保養(yǎng) 2.1 色譜柱的維護(hù)。我們?cè)谑褂眯碌纳V柱應(yīng)該在我們自己的液相色譜儀上進(jìn)行性能測(cè)試，即使用色譜柱附帶的檢驗(yàn)報(bào)告上測(cè)試條件和樣品來測(cè)定該色譜柱的柱效。并且，在以后的使用中，應(yīng)時(shí)常對(duì)色譜柱進(jìn)行測(cè)試。而且在使用的過程中常常有堵塞的現(xiàn)象，造成這種現(xiàn)象的主要原因是 ①溶劑中的不溶物 ?、跇悠分械牟蝗芪铩 、郾眠M(jìn)樣器等中的不溶物 ?、苤鶅?nèi)不溶物的形成等?！ ∪绻?dāng)色譜柱堵塞以后我們可以對(duì)色譜柱進(jìn)行修復(fù)，首先，使用含鹽緩沖液后(如離子對(duì)試劑)應(yīng)用溶解性強(qiáng)的溶劑(如水)進(jìn)行沖洗。其次，先斷開檢測(cè)器，然后用對(duì)來自樣品中的物質(zhì)有強(qiáng)溶解性的溶劑進(jìn)行沖洗，對(duì)于反相色譜柱，可使用甲醇、乙睛、四氫呋喃、氯仿、庚烷等，在此條件下，應(yīng)避免溶劑的pH低于2或高于8。后如果經(jīng)過上述還是沒有修復(fù)，色譜柱壓力還是沒有下降，則要斷開檢測(cè)器，將色譜柱反方向放置，然后檢查柱壓，若壓力穩(wěn)定下降，則保持色譜柱反方向連接，用低于0.5 ml/min 流速?zèng)_洗一小時(shí)。如果壓力不下降，則要看內(nèi)置過濾器是否被堵塞，如果被堵塞應(yīng)沖洗或更換，若進(jìn)口端的填料發(fā)生堵塞，柱子將不可能被恢復(fù)，只能通過去掉進(jìn)口端的部分填料，重新填充進(jìn)行有限的柱效恢復(fù)。而且修復(fù)的厚度是2-5mm。 2.2 色譜柱的保養(yǎng)?！ ∩V柱在使用前，好進(jìn)行柱的性能測(cè)試，并將結(jié)果保存起來，作為今后評(píng)價(jià)柱性能變化的參考。但要注意：柱性能可能由于所使用的樣品、流動(dòng)相、柱溫等條件的差異而有所不同；另外，在做柱性能測(cè)試時(shí)是按照色譜柱出廠報(bào)告中的條件進(jìn)行(出廠測(cè)試所使用的條件是佳條件)，只有這樣，測(cè)得的結(jié)果才有可比性。我們?cè)趯?duì)色譜柱使用前進(jìn)行測(cè)試以后，我們要根據(jù)不同的情況對(duì)色譜柱進(jìn)行保養(yǎng)： ?、俜聪嗌V柱每天實(shí)驗(yàn)后的保養(yǎng)：使用緩沖液或含鹽的流動(dòng)相，實(shí)驗(yàn)完成后應(yīng)用10%的甲醇/水沖洗30分鐘，洗掉色譜柱中的鹽，再用甲醇沖洗30分鐘。注意：不能用純水沖洗柱子，應(yīng)該在水中加入10%的甲醇，防止將填料沖塌陷?！ 、陂L期保存色譜柱：如色譜柱要長時(shí)間保存，必須存于合適的溶劑下。對(duì)于反相柱可以儲(chǔ)存于純甲醇或乙腈中，正相柱可以儲(chǔ)存于嚴(yán)格脫水后的純正己烷中，離子交換柱可以儲(chǔ)存于水(含防腐劑或柳硫汞)中，并將購買新色譜柱時(shí)附送的堵頭堵上。儲(chǔ)存的溫度好是室溫?！ 「爬ㄆ饋砭褪牵骸 、僦釉谌魏吻闆r下不能碰撞、彎曲或強(qiáng)烈震動(dòng)； ?、诋?dāng)柱子和色譜儀聯(lián)結(jié)時(shí)，閥件或管路一定要清洗干凈； ?、垡⒁饬鲃?dòng)相的脫氣； ?、鼙苊馐褂酶哒扯鹊娜軇┳鳛榱鲃?dòng)相； ?、葸M(jìn)樣樣品要提純； ?、迖?yán)格控制進(jìn)樣量； ?、呙刻旆治龉ぷ鹘Y(jié)束后，要清洗進(jìn)樣閥中殘留的樣品； ⑧每天分析測(cè)定結(jié)束后，都要用適當(dāng)?shù)娜軇﹣砬逑粗?； ?、崛舴治鲋L期不使用，應(yīng)用適當(dāng)有機(jī)溶劑保存并封閉?！ ? 色譜柱的維護(hù)與保養(yǎng)在高壓液相色譜中的應(yīng)用 液相色譜(HPLC)是20世紀(jì)60年代后期發(fā)展起來的分離分析技術(shù)，是現(xiàn)代分離測(cè)定的重要手段。問世以來，因其具有分離效能高、分析速度快、檢測(cè)靈敏度好、能分析高沸點(diǎn)但不能氣化的熱不穩(wěn)定生理活性物質(zhì)的特點(diǎn)而被廣泛應(yīng)用于生物化學(xué)、藥物及臨床分析。液相色譜柱是消耗品，會(huì)隨使用時(shí)間或進(jìn)樣的次數(shù)增加，出現(xiàn)色譜峰高降低，峰寬加大或出現(xiàn)肩峰，柱效下降。需要定期進(jìn)行清洗和再生，不同的色譜柱清洗方法各不相同比如： 3.1 反相柱 分別用甲醇:水=90:10，純甲醇(HPLC級(jí))，異丙醇(HPLC級(jí))，二氯甲烷(HPLC級(jí))等溶劑作為流動(dòng)相，依次沖洗，每種流動(dòng)相流經(jīng)色譜柱不少于20倍的色譜柱體積.然后再以相反的次序沖洗?！ ?.2 正相柱 分別用正己烷(HPLC級(jí))，異丙醇(HPLC級(jí))，二氯甲烷(HPLC級(jí))，甲醇(HPLC級(jí))等溶劑做流動(dòng)相，順次沖洗，每種流動(dòng)相流經(jīng)色譜柱不少于20倍的柱體積(異丙醇粘度大，可降低流速，避免壓力過高).注意使用溶劑的次序不要顛倒，用甲醇沖洗完后，再以相反的次序沖洗至正己烷，所有的流動(dòng)相必須嚴(yán)格脫水?！ ?.3 離子交換柱 長時(shí)間在緩沖溶液中使用和進(jìn)樣，將導(dǎo)致色譜柱離子交換能力下降，用稀酸緩沖溶液沖洗可以使陽離子柱再生，反之，用稀堿緩沖溶液沖洗可以使陰離子柱再生?！ ×硗猓€可以選擇能溶解柱內(nèi)污染物的溶劑為流動(dòng)相做正方向和反方向沖洗。但再生后的色譜柱柱效是不可能恢復(fù)到新柱的水平的.如果柱子裝反了，可以調(diào)回來，但可能會(huì)造成柱內(nèi)擔(dān)體塌陷.在不得已的情況下盡量不要反裝色譜柱?！ 〖訌?qiáng)色譜柱的維護(hù)與保養(yǎng)對(duì)于色譜柱高壓液相色譜中應(yīng)用有著重要的意義，制定色譜柱管理的標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程并嚴(yán)格執(zhí)行。每一根新購進(jìn)的色譜柱必須造冊(cè)登記，內(nèi)容包括：生產(chǎn)公司、品名、型號(hào)、規(guī)格、購進(jìn)時(shí)間、啟用時(shí)間、單價(jià)、柱內(nèi)保護(hù)溶液等。色譜柱分類存放，硅膠柱、化學(xué)鍵合硅膠柱、氰基或氨基柱、離子交換樹脂柱、凝膠柱各用一個(gè)色譜柱盒，盒上貼上標(biāo)簽，注明類別。隨柱說明書裝入密實(shí)袋附在登記本上。每啟用一根色譜柱，在色譜柱上貼上標(biāo)簽，注明啟用日期。每根柱子每兩個(gè)月保養(yǎng)一次，特別是對(duì)于一些使用頻率少的柱子，因?yàn)榉胖脮r(shí)間長，容易干柱，每一次做好保養(yǎng)記錄。對(duì)于確已失效的柱子，做好停用記錄，不能隨意丟棄，專門存放，如果現(xiàn)用的柱子的填料需要，可以用存放的柱子的填料。在從事生產(chǎn)的單位的質(zhì)檢部門，對(duì)于使用時(shí)間較長柱效降低的柱子，可把它用于檢測(cè)產(chǎn)品的中間體。 液相色譜柱的維護(hù)誤區(qū) 1.色譜柱的流向不能改變
在我們常規(guī)思維中，色譜柱上標(biāo)示的流向是不可改變的，每次使用都要遵循?？墒?，大家有沒有想過這個(gè)方向的作用是什么呢？為什么要標(biāo)示一個(gè)使用方向呢？
其實(shí)色譜柱前后端的填料及填裝工藝都是一樣的，標(biāo)示方向的目的就是讓我們?cè)谑褂弥杏涀×鲃?dòng)相從哪個(gè)方向流入色譜柱，那么這個(gè)流入段就是污染端。這樣就為我們?nèi)蘸缶S護(hù)或再生色譜柱做了準(zhǔn)備，而我們需要遵循這個(gè)規(guī)定應(yīng)該在色譜柱開始做樣后。
我曾將已經(jīng)污染過的色譜柱反方向來使用，如果保留時(shí)間不是很長，而色譜柱足夠長，還是能使用一段時(shí)間的。
2.不去看說明書，直接就上機(jī)使用
色譜柱內(nèi)部保存著什么溶劑一定要看清楚，因此色譜柱的說明書一定要看清楚，當(dāng)然也包括說明書上建議的維護(hù)保養(yǎng)規(guī)定，對(duì)我們都非常的有用。對(duì)于反相柱來說，溶劑基本就是乙腈或甲醇。但正相柱就不同了，因?yàn)檎嘀丝梢赃m用正相系統(tǒng)，也可以適用反相系統(tǒng)，因此一定要看清楚，對(duì)于你的方法來說是否需要置換色譜柱內(nèi)部保存溶劑。
3.用純水沖洗色譜柱才能把緩沖液沖洗干凈
使用強(qiáng)溶劑沖洗色譜柱對(duì)內(nèi)部填料的損傷是的，尤其是純水，除非你的色譜柱是耐水的。沖洗色譜柱方法是用流動(dòng)相比例的水系和有機(jī)系來沖洗。如果你認(rèn)為流動(dòng)相比例無法把色譜柱沖洗干凈或者此比例中有機(jī)系占有比例過大，你可以使用內(nèi)含10%左右的純水來沖洗。
4.保存在乙腈或甲醇中的新色譜柱可以直接使用
理論上液相色譜柱不同于氣相色譜柱需要活化，但是由于液相色譜柱內(nèi)部保存的有機(jī)系具有揮發(fā)性，因此在使用前還是應(yīng)該用小流速的和色譜柱內(nèi)部相同的溶劑沖洗一定的時(shí)間?？梢允?.5ml/min，120min，但咨詢廠家，根據(jù)色譜柱參數(shù)設(shè)定。
5.色譜柱應(yīng)該保存在純乙腈或甲醇中
根據(jù)第4條，色譜柱內(nèi)部保存液具有揮發(fā)性，因此為了減少其揮發(fā)速度，可以添加5%-10%的水，這樣的話可以在一定程度上減少一些有機(jī)系的揮發(fā)。如果再增加一個(gè)保險(xiǎn)，我們可以在堵緊堵頭后，再用封口膜封起來。同樣道理，色譜柱一段時(shí)間不用后，也應(yīng)該按照第4條，進(jìn)行小流速的沖洗色譜柱。
6.色譜柱污染后把篩板卸下來超聲清洗
對(duì)于色譜柱的污染，的就是篩板，因此我們的做法就是把柱頭卸下來，把篩板拿去超聲清洗。但是我們?cè)诓鹦哆^程中對(duì)色譜柱前端填料的損害遠(yuǎn)遠(yuǎn)大于污染照成的傷害，因?yàn)槲覀儾皇菍I(yè)的。因此建議這一步能不做就不做。
7.自己填裝色譜柱
和第6條相同，這一步做法幾乎可以把此色譜柱判死刑了，我們的填裝工具有什么呢？就是手工的，其填裝壓力遠(yuǎn)遠(yuǎn)小于工廠內(nèi)原始的填裝壓力。那么我們填裝的結(jié)果會(huì)是個(gè)什么樣也就很明顯了。
在我看來，自己填裝也就是練練手，熟悉一下這個(gè)過程，要把色譜柱維修好的可能性幾乎為零。
8.用異丙醇沖洗再生后，柱子效果更差了
這種情況我自己就遇到過，還好那根柱子本來就打算報(bào)廢了，因此也沒有照成多少損失。但是這是什么原因呢？其實(shí)很簡單，就是在我反向沖洗前沒有把管路中的污染物沖洗干凈就直接接了柱子。所以說，方法是沒有錯(cuò)的，色譜柱受污染時(shí)，我們應(yīng)該先想到儀器也污染了！
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