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上海威正翔禹生物科技有限公司
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閱讀：822發(fā)布時間：2017-10-19
當(dāng)我們在養(yǎng)細(xì)胞的時候，有可能會出現(xiàn)如下的狀況：
如果排除了其他試劑選擇不當(dāng)、細(xì)胞株老化、細(xì)菌污染……原因，而仍有上述一種或幾種情況，則高度提示：細(xì)胞可能出現(xiàn)了支原體污染。
據(jù)報道，細(xì)胞培養(yǎng)中發(fā)生支原體污染的機率較高，會達(dá)到70%左右，常規(guī)抗生素的使用對支原體幾乎無效。
那么，支原體污染，對細(xì)胞培養(yǎng)有什么危害呢？
支原體污染的危害
1. 細(xì)胞狀態(tài)不佳，生長速度慢，實驗無法推進(jìn)
2. 細(xì)胞內(nèi)DNA、RNA及蛋白表達(dá)發(fā)生改變，影響實驗結(jié)果，導(dǎo)致實驗數(shù)據(jù)不準(zhǔn)確，時間、經(jīng)費的浪費
3. 一株污染的細(xì)胞成為實驗室的污染源，對工作區(qū)域以及培養(yǎng)箱和液氮罐造成污染，進(jìn)而污染其他細(xì)胞，導(dǎo)致其他細(xì)胞繼發(fā)性污染，實驗受影響，數(shù)據(jù)無法重復(fù)，預(yù)期結(jié)果出不來
圖：支原體給細(xì)胞帶來的諸多影響
圖：一管細(xì)胞的污染可影響到其他細(xì)胞
那么，怎樣明確細(xì)胞是否有支原體污染呢？
目前普遍使用的支原體檢測方法
1、支原體的分離培養(yǎng)
它是支原體污染鑒定的金標(biāo)準(zhǔn)，準(zhǔn)確，價格便宜。但支原體在分離培養(yǎng)的過程中，要長出明顯克隆至少需要4周時間，所需時間較長。
2、ELISA方法
檢測步驟復(fù)雜，出現(xiàn)誤差的幾率較高，對實驗者操作技巧有要求。同時試劑盒成本較高，普遍不被選用。
3、DNA熒光染色法
它采用熒光染色劑Hoechst 33258和支原體DNA富含A-T的區(qū)域結(jié)合。價格適中。由于DNA檢測需要將可疑樣品與指示細(xì)胞共同培養(yǎng)，因此一般需要幾天后才出結(jié)果。有假陽性和假陰性，需要與其他方法結(jié)合使用。
4、PCR技術(shù)
它根據(jù)支原體核糖體16s-23s rRNA的特異保守序列設(shè)計引物，對待檢樣本DNA進(jìn)行擴增，通過對擴增產(chǎn)物的大小分析作出診斷（見下圖）。操作簡單、速度快，只需2-3小時即可出結(jié)果，通量高，價格適中。
但是，不同廠家生產(chǎn)的PCR檢測試劑盒由于引物及內(nèi)在設(shè)計的不同，其準(zhǔn)確度和敏感度有天壤之別。
目前，被各大實驗室及生物藥廠普遍選用的是德國Minerva Biolabs公司開發(fā)生產(chǎn)的支原體PCR檢測試劑盒。試劑盒在267bp的條帶，涵蓋了歐洲《藥典》中zui易感染細(xì)胞的26種支原體亞型，保證了其*的敏感度；通過內(nèi)控條帶的設(shè)計，防止了假陰性的發(fā)生。
我國*在2008年豬藍(lán)耳病疫苗研制的重點項目中，實驗者用此檢測法與培養(yǎng)法做了超過100次的平行比對實驗，結(jié)果全部一致，假陽性率和假陰性率為零。
因此，用PCR方法檢測支原體，其準(zhǔn)確性與選擇的試劑盒的質(zhì)量有直接相關(guān)性。
圖：有支原體污染的樣本在267bp位置有陽性條帶。Internal Control為內(nèi)部對照，在190bp，保證PCR反應(yīng)的正常。
商鋪：http://www.kytsldc.cn/st556336/
主營產(chǎn)品：進(jìn)口Ausbian胎牛血清,液體培養(yǎng)基,支原體祛除檢測劑,微生物培養(yǎng)基,細(xì)胞培養(yǎng)試劑,細(xì)胞分離液,動物細(xì)胞培養(yǎng),DNA污染防治,微生物工業(yè)品,疫苗檢測
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