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微生物染色液配制及染色法
2.1 美藍(lán)染色法
2.1.1 呂氏堿性美藍(lán)染色液
美藍(lán) 0.3g
95%乙醇 30mL
0.01%氫氧化鉀溶液 100mL
將美藍(lán)溶解于乙醇中，然后與氫氧化鉀溶液混合。
2.1.2 染色法
將涂片在火焰上固定，待冷。滴加染液，染1～3min，水洗，待干，鏡檢。
2.1.3 結(jié)果
菌體呈藍(lán)色。
2.2 革蘭氏染色法
2.2.1 結(jié)晶紫染色液
結(jié)晶紫 1g
95%乙醇 20mL
1%草酸銨水溶液 80mL
將結(jié)晶紫溶解于乙醇中，然后與草酸銨溶液混合。
2.2.2 革蘭氏碘液
碘 1g
碘化鉀 2g
蒸餾水 300mL
將碘與碘化鉀*行混合，加入蒸餾水少許，充分振搖，待*溶解后，再加蒸餾水至300mL。
2.2.3 沙黃復(fù)染液
沙黃 0.25g
95%乙醇 10mL
蒸餾水 90mL
將沙黃溶解于乙醇中，然后用蒸餾水稀釋。
2.2.4 染色法
2.2.4.1 將涂片在火焰上固定，滴加結(jié)晶紫染色液，染1min，水洗。
2.2.4.2 滴加革蘭氏碘液，作用1min，水洗。
2.2.4.3 滴加95%乙醇脫色，約30s；或?qū)⒁掖嫉螡M整個(gè)涂片，立即傾去，再用乙醇滴滿整個(gè)涂片，脫色10s。
2.2.4.4 水洗，滴加復(fù)染液，復(fù)染1min。水洗，待干，鏡檢。
2.2.5 結(jié)果
革蘭氏陽(yáng)性菌呈紫色。革蘭氏陰性菌呈紅色。
注：亦可用1：10稀釋石炭酸復(fù)紅染色液作復(fù)染液，復(fù)染時(shí)間僅需10s。
2.3 耐酸性染色法(萎－倪二氏法)
2.3.1 石炭酸品紅染色液
堿性品紅 0.3g
95%乙醇 10mL
5%酚水溶液 90mL
將品紅溶解于乙醇中，然后與酚溶液混合。
2.3.2 3%鹽酸－乙醇
濃鹽酸 3mL
95%乙醇 97mL
2.3.3 復(fù)染液
呂氏堿性美藍(lán)染色液。
2.3.4 染色法
2.3.4.1 將涂片在火焰上加熱固定，滴加石炭酸品紅染色液，徐徐加熱至有蒸氣出現(xiàn)，但切 不可使沸騰。染液如因蒸發(fā)減少時(shí)，應(yīng)隨時(shí)添加。染5min，傾去染液，水洗。
2.3.4.2 滴加鹽酸－乙醇脫色，直至無(wú)紅色脫落為止(所需時(shí)間視涂片厚薄而定，一般為1～3min)，水洗。
2.3.4.3 滴加呂氏堿性美藍(lán)染色液，復(fù)染30s～1min，水洗，待干，鏡檢。
2.3.5 結(jié)果：耐酸性細(xì)菌呈紅色，其他細(xì)菌、細(xì)胞等物質(zhì)呈藍(lán)色。
2.4 柯氏染色法
2.4.1 染色液
2.4.1.1 0.5%沙黃液。
2.4.1.2 0.5%孔雀綠液。
2.4.2 染色法
2.4.2.1 將涂片在火焰上固定，滴加0.5%沙黃液，并加熱至出現(xiàn)氣泡，約2～3min，水洗。
2.4.2.2 滴加0.5%孔雀綠液，復(fù)染40～50s。水洗，待干，鏡檢。
2.4.3 結(jié)果
布氏桿菌呈紅色，其他細(xì)菌及細(xì)胞呈綠色。
2.5 奧爾特氏莢膜染色法
2.5.1 染色液
沙黃 3g
蒸餾水 100mL
用乳缽研磨溶解。
2.5.2 染色法
將涂片在火焰上固定，滴加染色液，并加熱至產(chǎn)生蒸氣后，繼續(xù)染3min。水洗，待干，鏡檢。
2.5.3 結(jié)果
炭疽芽胞桿菌菌體呈赤褐色，莢膜呈黃色。
2.6 瑞氏染色法
2.6.1 染色液
瑞氏色素 0.1g
甲醇 60mL
用乳缽研磨溶解。
2.6.2 染色法
2.6.2.1 涂片待自然干燥后，滴加染色液，固定1min。
2.6.2.2 加入等量蒸餾水(pH6.5)，染色3～5min。
2.6.2.3 用蒸餾水沖洗，待干，鏡檢。
2.7 鞭毛染色法
2.7.1 染色液的配制
2.7.1.1 甲液：稱丹寧酸5g、氯化高鐵(FeCl3)1.5g，溶于100mL蒸餾水中，待溶解后加入1%的氫氧化鈉溶液1mL和15%的甲醛溶液2mL。
2.7.1.2 乙液：稱2g硝酸銀溶于100mL蒸餾水中。
在90mL乙液中滴加濃氫氧化銨溶液，到出現(xiàn)沉淀后，再滴加使其變?yōu)槌吻?，然后用其?0mL乙液小心滴加至澄清液中，至出現(xiàn)輕微霧狀為止(此為關(guān)鍵性操作，應(yīng)特別小心)。滴加氫氧化銨和用剩余乙液回滴時(shí)，要邊滴邊充分搖蕩，染液當(dāng)天配，當(dāng)天使用，2～3d基本無(wú)效。
2.7.2 染色法
在風(fēng)干的載玻片上滴加甲液，4～6min后，用蒸餾水輕輕沖凈。再加乙液，緩緩加熱至冒汽，維持約半分鐘(加熱時(shí)注意勿使出現(xiàn)干燥面)。在菌體多的部位可呈深褐色到黑色，停止加熱，用水沖凈，干后鏡檢，菌體及鞭毛為深褐色到黑色。
2.8 堿性復(fù)紅染色法
將0.5g堿性復(fù)紅染料溶解于20mL95%乙醇中，然后用蒸餾水稀釋至100mL。如有不溶物時(shí)，可用濾紙過(guò)濾，或靜置后取上清液備用。
注：本染色液系用于蘇云金芽胞內(nèi)蛋白質(zhì)毒素結(jié)晶的染色，藉以與蠟樣芽胞桿菌相區(qū)別
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