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江蘇菲亞生物科技有限公司
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ELISA試劑盒診斷牛副結(jié)核病的實(shí)驗(yàn)方法
2018-5-14 閱讀(1066)
一、ELISA試劑盒診斷牛副結(jié)核病的操作方法
1、血清處理 取待檢血清、參考陽(yáng)性血清、參考陰性血清各0.10ml，加生理鹽水0.80ml，加草分枝桿菌吸收抗原0.10ml，混勻，37℃感作1h.取0.10ml，ELISA試劑盒加血清稀釋液0.90ml（注意血清稀釋液中加牛血清白蛋白，不加犢牛血清）?；靹蚣纯?/span>
2、抗原包被 以抗原稀釋液將副結(jié)核親和層析抗原稀釋至50µg/ml,每孔包被0.1ml.部分對(duì)照孔以牛血清白蛋白（50µg/ml）包被。
3、正式試驗(yàn) 按表12－4進(jìn)行。每個(gè)樣品加2孔，以求OD平均值。
二、ELISA試劑盒診斷牛副結(jié)核病的材料與試劑
1、牛副結(jié)核病參考陰性血清
2、草分枝桿菌吸收抗原
3、兔抗牛IgG酶標(biāo)抗體
4、牛副結(jié)核病參考陽(yáng)性血清
5、試劑及溶液配制同第五節(jié)豬瘟ELISA。
1～5項(xiàng)均由單位供應(yīng)。
6、器材ELISA板，酶聯(lián)免疫吸附檢測(cè)儀、加樣器、洗瓶、恒溫箱等。
7、副結(jié)核分枝桿菌親和層析抗原
三、ELISA試劑盒診斷牛副結(jié)核病的結(jié)果判定
在對(duì)照組成立的前提下， 即參考陽(yáng)性血清呈棕黃色，參考陰性血清及其它對(duì)照孔呈無(wú)色或淺黃色， 判定待測(cè)結(jié)果。
1、酶標(biāo)儀判定（490nm） 以底物溶液對(duì)照孔調(diào)零，校正參考陽(yáng)性血清OD值為1.0（或相應(yīng)規(guī)定值），測(cè)定待檢孔。當(dāng)OD≥0.50，判ELISA陽(yáng)性（＋）；0.40≤OD≤0.49判ELISA可凝（±）；OD<0.40，判ELISA陰性（－）。
2、目測(cè)判定 與參考陽(yáng)性血清孔顏色相當(dāng)，即呈棕黃色，判為ELISA陽(yáng)性（＋）。
