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江蘇菲亞生物科技有限公司
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淋巴細胞轉化試驗技術:形態(tài)學檢查法
2019-4-8 閱讀(1465)
當機體受到抗原的刺激時，T淋巴細胞就可以轉化為淋巴母細胞，進一步轉化為致敏淋巴細胞。這種轉化在一定的程度上代表著機體的細胞免疫功能狀態(tài)。這種轉化也可在體外的T細胞的培養(yǎng)過程中加入適當?shù)拇碳ぴ霈F(xiàn)，并表現(xiàn)出形態(tài)上的變化。目前常采用PHA誘發(fā)的淋巴細胞轉化試驗作為檢查機體細胞免疫的功能狀態(tài)。具體方法有形態(tài)學檢查法。
（一）操作方法
1． 于培養(yǎng)瓶內加0.2ml馬血，對照組與試驗組各做2瓶，試驗組均加PHA 30?g；
2．37℃培養(yǎng)72h，每天輕搖1~2次；
3．取出培養(yǎng)瓶，搖散血*，倒入離心管，3 000r/min離心10min，去上清液；
4．用血球泥制備推片，晾干；
5．以瑞氏染液染2min~3min，加等量緩沖液，混勻繼續(xù)染3min，蒸餾水沖洗后再用姬姆薩染液染2min~3min。加等量緩沖染液感作7min~8min，餾水沖洗，晾干；
6．鏡檢，觀察，計數(shù)。
（二）注意事項
1．培養(yǎng)液適pH為7.2~7.4，過酸過堿都會影響細胞的生長而降低轉化率。培養(yǎng)液的類型與動物的白細胞有關，如小鼠的淋轉試驗，用RPMI-1640較好，用199液則不成功。
2．培養(yǎng)時間 以72h~120h轉化率較高，超過這個時間，則轉化率反而下降。
3．吞噬細胞有時在形態(tài)上易與“過渡型"混淆。但巨噬細胞有其固有的特點，核占細胞比較小且偏一邊，核染色質濃集，細胞漿呈藍灰色或紅褐色，胞漿內有大小不等的顆?；蛲淌晌?，且含有大小不等的氣泡。
4．涂片要少蘸些細胞，推出尾部來，因淋巴細胞較大，易集中在尾部及邊緣。
5．觀察淋巴細胞轉化，染色不要太濃，以便觀察核仁。
6．嚴格的無菌操作，是淋巴細胞轉化試驗成功的關鍵。
