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ELISA實(shí)驗(yàn)結(jié)果不理想莫慌張
2019-8-15 閱讀(1200)
ELISA實(shí)驗(yàn)中難免會出現(xiàn)錯誤，實(shí)驗(yàn)結(jié)果不理想也時有發(fā)生，遇到這樣的事情不要慌張，盡量找出解決問題的方法，今天就讓上海勁馬與您一起分享一下有哪些原因會使ELISA實(shí)驗(yàn)的結(jié)果不理想，和常見的解決方案。
一，生物實(shí)驗(yàn)室的污染
生物實(shí)驗(yàn)室產(chǎn)生的廢液污染主要是化學(xué)性污染和生物性污染，另外還有放射性污染。我們經(jīng)常認(rèn)為實(shí)驗(yàn)室中的有機(jī)試劑并不直接參與發(fā)生反應(yīng)，僅僅起溶劑作用，因此就直接把消耗的有機(jī)試劑以各種形式排放到周邊的環(huán)境中，排放總量大致就相當(dāng)于試劑的消耗量，然而日復(fù)一日，年復(fù)一年，這樣累積下來的排放量就十分可觀了。
二，ELISA試劑盒花板現(xiàn)象
關(guān)于ELISA試劑盒結(jié)果“花板"的問題對檢測數(shù)據(jù)造成了很大影響，往往會使檢測者做出誤判，是實(shí)驗(yàn)中必須要注意和避免的。
針對這種“花板"現(xiàn)象我們通過多次實(shí)驗(yàn)的分析和判斷，總結(jié)了一些經(jīng)驗(yàn)，分析如下：
1 標(biāo)本、試劑、儀器
1.1 標(biāo)本 出入境人員的血液標(biāo)本。
1.2 試劑 HBsAg、HCV、HIV、梅毒試劑均為不同廠家的ELISA試劑盒。
1.3 儀器 LD4-2型腦心機(jī)BID RAD1575型洗板機(jī)BID RAD550酶標(biāo)儀。
2 方法
所有被檢出入境人員的血液標(biāo)本，按照各個廠家提供的ELISA試劑盒說明書進(jìn)行HBsAg-HCV-HIV梅毒等檢驗(yàn)項(xiàng)目操作。所有試劑均在有效期內(nèi)使用。
3 結(jié)果
所使用不同廠家的試劑有時會出現(xiàn)“花板"問題。
4 分析
在所有標(biāo)本進(jìn)行檢測的過程中，所用的儀器及加樣過程都處于正常狀態(tài)的情況下，步驟均按照各種試劑說明書的要求去做，排除實(shí)驗(yàn)所用儀器和操作步驟對實(shí)驗(yàn)結(jié)果的影響外，ELISA試劑盒內(nèi)的空白、陰性和陽性對照以及室內(nèi)質(zhì)控值都很正常，只有檢測的血液標(biāo)本情況異常。根據(jù)國家和疾控中心報(bào)告陽性率的比例不應(yīng)該是很高的情況下，HBsAg在用ELISA之前都經(jīng)過了快速金標(biāo)試劑的檢測，陽性標(biāo)本得到了一定的控制。因此，原因可能是在標(biāo)本的處理，特別是放置時間、離心速度和離心時間方面的問題。所以，標(biāo)本的處理就成為實(shí)驗(yàn)結(jié)果的主要可疑因素。為了避免“花板"現(xiàn)象的出現(xiàn)，降低檢測的假陽性率，獲取準(zhǔn)確的實(shí)驗(yàn)結(jié)果，應(yīng)選擇靈敏度高、特異性好、穩(wěn)定性好、批間差小、操作方便省時的ELISA試劑。使用ELISA試劑盒對血液HBsAg-HCV-HIV及梅毒等實(shí)驗(yàn)檢測的結(jié)果中，空白和陰性，陽性對照以及室內(nèi)質(zhì)控孔結(jié)果正常，根據(jù)衛(wèi)生部臨檢中心提供的數(shù)據(jù)，HBsAg0.5ng1ng-HCV-HIV梅毒正常范圍均為2NCU，但血液標(biāo)本孔的OD值比較高（大多數(shù)OD值≥0.070）。標(biāo)本的陽性率很高，每板除對照孔外，有時陽性高達(dá)10孔之多，而大多數(shù)真陽性標(biāo)本都出現(xiàn)弱陽性結(jié)果。
