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英文名稱 | Rat (PEMT) ELISA Kit | ||
中文名稱 | 大鼠磷脂酰乙醇胺N甲基轉(zhuǎn)移酶(PEMT)ELISA試劑盒 | ||
貨號(hào) | YMR30636 | 種屬 | Rat/大鼠 |
規(guī)格 | 96T/Kit (8*12 strips) 48T/Kit (8*6 strips) | ||
檢測(cè)方法 | 雙抗體夾心法以及雙抗體一步夾心法(來(lái)電索取說(shuō)明,客戶自行選擇) | ||
檢測(cè)范圍 | 添加索取說(shuō)明書查看 | 靈敏度 | 添加索取說(shuō)明書查看 |
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大鼠磷脂酰乙醇胺N甲基轉(zhuǎn)移酶(PEMT)ELISA試劑盒實(shí)驗(yàn)設(shè)備及操作步驟
ELISA試劑盒檢測(cè)方法都可以通過(guò)標(biāo)準(zhǔn)酶標(biāo)儀使用。
1. 標(biāo)準(zhǔn)品的稀釋:ELISA試劑盒內(nèi)附標(biāo)準(zhǔn)品一支,用戶在小試管中進(jìn)行稀釋。
2. 加樣:分別設(shè)空白孔、標(biāo)準(zhǔn)孔、待測(cè)樣品孔。
3. 溫育:用封板膜封板后置37℃溫育30 分鐘。
4. 配液:將30 倍濃縮洗滌液用蒸餾水30 倍稀釋后備用
5. 洗滌:小心揭掉封板膜,棄去液體,甩干,每孔加滿洗滌液,靜置30 秒后棄去,如此重復(fù)5 次,拍干。
6. 加酶:每孔加入酶標(biāo)試劑50μl,空白孔除外。
7. 溫育
8. 洗滌
9. 顯色:每孔先加入顯色劑A50μl,再加入顯色劑B50μl,輕輕震蕩混勻,37℃避光顯色10 分鐘.
10. 終止:每孔加終止液50μl,終止反應(yīng)。
11. 測(cè)定:以空白空調(diào)零,450nm 波長(zhǎng)依序測(cè)量各孔的吸光度。測(cè)定應(yīng)在加終止液后15 分鐘以內(nèi)進(jìn)行。
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技術(shù)問答:
提問:ELISA試劑盒每盒可測(cè)量多少標(biāo)本啊?
回答:每個(gè)96孔板里面標(biāo)準(zhǔn)曲線至少要用掉12-16個(gè)孔,剩下的孔如果每個(gè)標(biāo)本用兩個(gè)孔,大概能做40個(gè)標(biāo)本.分時(shí)間段的說(shuō)法我沒聽懂.一個(gè)試劑如果一次沒有用完當(dāng)然可以繼續(xù)用多次.區(qū)別在于多次使用的時(shí)候每次都需要做標(biāo)準(zhǔn)曲線,比合在一起做的話多費(fèi)一些料,所以確定重組蛋白和相應(yīng)的試劑夠用就好了.
提問:ELISA試劑盒中的抗體有哪些?
回答:ELISA的種類有多種,常用的是DAS-ELISA、NCM-ELISA、TDS-ELISA等. DAS-ELISA試劑盒中抗體有包被抗體和酶標(biāo)抗體,這兩種抗體是一種抗體,前者沒有酶標(biāo),后者用酶進(jìn)行了標(biāo)記. NCM-ELISA一般有一抗和二抗,這兩種抗體不一樣,前者(一抗)一般是鼠抗體或兔抗體,沒有酶標(biāo),相對(duì)應(yīng)的二抗一般是羊抗鼠或羊抗兔抗體,用酶進(jìn)行標(biāo)記.也有用馬大規(guī)模備抗體的.
提問:ELISA試劑盒中,組織樣本用什么勻漿液來(lái)進(jìn)行組織勻漿?
回答:PBS就可以吧。
提問:人或鼠的ELISA試劑盒可用于豬的檢測(cè)嗎?
回答:*詢問一下試劑盒提供廠家對(duì)于目標(biāo)檢測(cè)分子,不同種屬的交叉反應(yīng)效果。一般,人與豬,小鼠與豬之間的交叉反應(yīng)概率并不高
提問:如何降低ELISA試劑盒實(shí)驗(yàn)背景的方法?
回答:ELISA實(shí)驗(yàn)的原理似乎很簡(jiǎn)單,不外乎固定抗原,添加一抗、二抗和底物,間中夾雜著洗滌和封閉。然而,即使是平淡無(wú)奇的洗滌和封閉,如果做得不太好,也有可能毀了整個(gè)實(shí)驗(yàn)。在實(shí)驗(yàn)結(jié)束時(shí),我們是否能獲得有意義的信息,ELISA試劑盒這在很大程度上取決于結(jié)果的信噪比。ELISA試劑盒背景噪音會(huì)影響您對(duì)結(jié)果的判斷。