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組織細(xì)胞色素ELISA試劑盒樣品準(zhǔn)備
1.手術(shù)取出動(dòng)物組織,并秤重以確定500毫克組織重量(實(shí)驗(yàn)前使動(dòng)物空腹12至24小時(shí))
2.(選擇步驟)放進(jìn)預(yù)冷的15毫升錐形離心管
3.(選擇步驟)加入xx毫升清理液(Reagent A)清洗1次
4.移入一個(gè)液氮凍存管
5.即刻放進(jìn)液氮罐過夜
6.次日從液氮罐里取出,即刻(快速度)碾碎組織成粉末(注意:切莫使組織凍融)
7.放進(jìn)一個(gè)15毫升錐形離心管
8.加入xx毫升預(yù)冷的裂解液(Reagent B)
9.渦旋震蕩5秒,充分混勻
10.即刻放入預(yù)冷的DOUNCE勻漿器
11.在冰槽里用勻漿棒勻化組織(約40下)
12.將所有組織勻漿物移入15毫升錐形離心管
13.放進(jìn)4℃超速離心機(jī)離心30分鐘,速度為9000g
14.移取上清液到2個(gè)新的1.5毫升離心管
15.放進(jìn)4℃超速離心機(jī)離心60分鐘,速度為100000g
16.小心抽去上清液
17.分別加入xx微升裂解液(Reagent B)
18.合并到1個(gè)1.5毫升離心管
19.移取10微升進(jìn)行蛋白定量檢測(注意:建議使用 Bradford蛋白質(zhì)濃度定量試劑盒-30030.1)
20.即刻放進(jìn)-70℃保存或置于冰槽里繼續(xù)后續(xù)操作
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