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豬O型口蹄疫抗體（FMDV-OAb）ELISA試劑盒說明
閱讀：276 發(fā)布時間：2018-1-19豬O型口蹄疫抗體（FMDV-OAb）ELISA試劑盒說明
本試劑盒用于測定豬血清、血漿及相關(guān)液體樣本中O型口蹄疫抗體（FMDV-OAb）表
達。
實驗原理
本試劑盒應(yīng)用雙抗原夾心法測定標本中豬O型口蹄疫抗體（FMDV-OAb）表達。用純化的
抗原包被微孔板，制成固相抗原，可與樣品中O型口蹄疫抗體（FMDV-OAb）相結(jié)合，經(jīng)
洗滌除去未結(jié)合的抗原和其他成分后再與HRP標記的抗原結(jié)合，形成抗原-抗體-酶標抗原
復(fù)合物，經(jīng)過*洗滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍色，并在酸
的作用下轉(zhuǎn)化成zui終的黃色。用酶標儀在450nm波長下測定吸光度（OD值），與CUTOFF
值相比較，從而判定標本中豬O型口蹄疫抗體（FMDV-OAb）的存在與否。
標本要求
1．標本采集后盡早進行提取，提取按相關(guān)文獻進行，提取后應(yīng)盡快進行實驗。若不能
馬上進行試驗，可將標本放于-20℃保存，但應(yīng)避免反復(fù)凍融
2．不能檢測含NaN3的樣品，因NaN3抑制辣根過氧化物酶的（HRP）活性。
豬O型口蹄疫抗體（FMDV-OAb）ELISA試劑盒操作步驟
1.編號：將樣品對應(yīng)微孔按序編號，每板應(yīng)設(shè)陰性對照2孔、陽性對照2孔、空白對照1
孔（空白對照孔不加樣品及酶標試劑，其余各步操作相同）
2.加樣：分別在陰、陽性對照孔中加入陰性對照、陽性對照50µl。然后在待測樣品孔先
加樣品稀釋液40µl，然后再加待測樣品10µl。加樣將樣品加于酶標板孔底部，盡量不
觸及孔壁，輕輕晃動混勻，
3.溫育：用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。
4.配液：將30倍濃縮洗滌液用蒸餾水30倍稀釋后備用
5.洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿洗滌液，靜置30秒后棄去，如此
重復(fù)5次，拍干。
6.加酶：每孔加入酶標試劑50µl，空白孔除外。
7.溫育：操作同3。
8.洗滌：操作同5。
9.顯色：每孔先加入顯色劑A50µl，再加入顯色劑B50µl，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色
10分鐘.
10.終止：每孔加終止液50µl，終止反應(yīng)（此時藍色立轉(zhuǎn)黃色）。
11.測定：以空白空調(diào)零，450nm波長依序測量各孔的吸光度（OD值）。測定應(yīng)在加終止
液后15分鐘以內(nèi)進行。
操作程序總結(jié)：
計算和結(jié)果判定：
試驗有效性：陽性對照孔平均值≥1.00;陰性對照平均值≤0.10
臨界值（CUTOFF）計算：臨界值=陰性對照孔平均值+0.15
陰性判定：樣品OD值<臨界值（CUTOFF）者為O型口蹄疫抗體（FMDV-OAb）陰
性
陽性判定：樣品OD值≥臨界值（CUTOFF）者為O型口蹄疫抗體（FMDV-OAb）陽
性
。
豬O型口蹄疫抗體（FMDV-OAb）ELISA試劑盒注意事項
1．操作嚴格按照說明書進行，本試劑不同批號組分不得混用。
2．試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應(yīng)在室溫平衡15-30分鐘后方可使用，酶標包被板開封后如未
用完，板條應(yīng)裝入密封袋中保存。
3．濃洗滌液可能會有結(jié)晶析出，稀釋時可在水浴中加溫助溶，洗滌時不影響結(jié)果。
4．封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。
5．底物請避光保存。
6．試驗結(jié)果判定必須以酶標儀讀數(shù)為準，使用雙波長檢測時，參考波長為630nm
7．所有樣品，洗滌液和各種廢棄物都應(yīng)按傳染物處理。終止液為2M的硫酸，使用時必須
注意安全。
保存條件及有效期
1．試劑盒保存：；2-8℃。
2．有效期：6個月