大鼠主動(dòng)脈內(nèi)皮細(xì)胞原代培養(yǎng)

1.組織源：150-200g大鼠主動(dòng)脈
2.性別：雌/雄性
3.消毒方法：75%酒精消毒， PBS
4.培養(yǎng)用液
基礎(chǔ)培養(yǎng)液:血管內(nèi)皮細(xì)胞培養(yǎng)基
添加因子:FBS, Heparin, Endothelial Cell Growth Supplement, Penicillin, Streptomycin等。
5.消化方式：
成分：0.1% Collagenase-2，0.1%*
時(shí)間：20min
溫度：37℃
6.細(xì)胞原代分離、培養(yǎng)基本操作步驟：
大鼠主動(dòng)脈內(nèi)皮細(xì)胞原代培養(yǎng)

a.腹腔注射戊*鈉麻醉處死大鼠，腹部噴75%酒精消毒，無菌條件下取出胸主動(dòng)脈組織；
b.去除主動(dòng)脈組織表面的脂肪和結(jié)締組織，HBSS清洗2次，解剖顯微鏡下倒置主動(dòng)脈，15ml離心管中加入3ml膠原酶消化液，37℃消化20min，消化期間每10min輕輕充分吹打細(xì)胞消化液，使細(xì)胞盡量脫落；
c.用200目細(xì)胞篩濾去未消化部分組織，之后1500rpm離心5min；棄上清，沉淀細(xì)胞加3ml*培養(yǎng)液重懸，
d.然后，用0.1%*消化組織20min，消化期間每10min輕輕充分吹打細(xì)胞消化液，使細(xì)胞盡量脫落；
e.用200目細(xì)胞篩濾去未消化部分組織，之后1500rpm離心5min；棄上清，沉淀細(xì)胞加3ml*培養(yǎng)液重懸
f.將c和e步驟重懸培養(yǎng)液混勻后接種于25cm2培養(yǎng)瓶中，37℃、5%CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)2h；zui后，輕輕吸出瓶中培養(yǎng)基，之后往瓶中加入5ml新鮮*培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng)。