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PCR實(shí)驗(yàn)室凈化系統(tǒng)設(shè)計(jì)要求有哪些
??PCR實(shí)驗(yàn)室又叫基因擴(kuò)增實(shí)驗(yàn)室。PCR是聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(Polymerase Chain Reaction)的簡(jiǎn)稱。是一種分子生物學(xué)技術(shù),用于放大特定的DNA片段,可看作生物體外的特殊DNA復(fù)制。通過(guò)DNA基因追蹤系統(tǒng),能迅速掌握患者體內(nèi)的病毒含量,其精確度高達(dá)納米級(jí)別。
當(dāng)前,PCR實(shí)驗(yàn)室廣泛應(yīng)用于醫(yī)院及各疾病預(yù)防控制中心的疫病檢驗(yàn),2010年,衛(wèi)生部辦公廳制定并發(fā)布了《醫(yī)療機(jī)構(gòu)臨床基因擴(kuò)增檢驗(yàn)實(shí)驗(yàn)室管理辦法》以及《醫(yī)療機(jī)構(gòu)臨床基因擴(kuò)增檢驗(yàn)實(shí)驗(yàn)室工作導(dǎo)則》(以下簡(jiǎn)稱導(dǎo)則)。導(dǎo)則規(guī)定了PCR實(shí)驗(yàn)室設(shè)計(jì)的基本原則,原則上PCR實(shí)驗(yàn)室需設(shè)置4個(gè)區(qū)域∶試劑儲(chǔ)存和準(zhǔn)備區(qū)、標(biāo)本制備區(qū)、擴(kuò)增區(qū)、產(chǎn)物分析區(qū),各個(gè)分區(qū)具體設(shè)備配置也各有不同。
試劑儲(chǔ)存和準(zhǔn)備區(qū):冷凍冷藏冰箱、超凈工作臺(tái)、臺(tái)式離心機(jī)、掌上離心機(jī)、微孔板離心機(jī)、可移動(dòng)紫外燈、混勻器、田平、微量加樣器等;
標(biāo)本制備區(qū):2~8℃冰箱、低溫冰箱或超低溫冰箱、生物柜、高速離心機(jī)、均質(zhì)儀、核酸提取儀、蒸汽滅菌器、超微量紫外分光光度計(jì)、過(guò)氧化氫消毒劑、金屬浴、水浴箱等;
?擴(kuò)增區(qū):普通PCR儀、熒光定量PCR儀、數(shù)字PCR儀、質(zhì)譜儀、微量加樣器、低溫冰箱、可移動(dòng)紫外燈等;
?產(chǎn)物分析區(qū):凝膠成像系統(tǒng)、電泳系統(tǒng)、微量加樣器、可移動(dòng)紫外燈等。
根據(jù)導(dǎo)則要求,PCR 實(shí)驗(yàn)室各個(gè)區(qū)域無(wú)論在空間上還是使用中必須*獨(dú)立,不能有任何空氣的直接相通??諝饬飨蚩砂凑眨涸噭﹥?chǔ)存和準(zhǔn)備區(qū)——標(biāo)本制備區(qū)——擴(kuò)增區(qū)——產(chǎn)物分析區(qū)壓力遞減的方式進(jìn)行,防止各區(qū)域空氣的交叉污染。
PCR 反應(yīng)的最大特點(diǎn)就是的靈敏性,極其微量的污染就會(huì)造成 PCR 實(shí)驗(yàn)結(jié)果的假陽(yáng)性,因此組合型 PCR 實(shí)驗(yàn)室設(shè)計(jì)的問(wèn)題就是避免交叉污染,而組合型 PCR 實(shí)驗(yàn)室的平面布局模式及各區(qū)域的壓力梯度控制成為了解決這一問(wèn)題的關(guān)鍵。
現(xiàn)行標(biāo)準(zhǔn)《疾病預(yù)防控制中心建筑技術(shù)規(guī)范》GB 50881 對(duì) PCR 實(shí)驗(yàn)室的各項(xiàng)設(shè)計(jì)參數(shù)進(jìn)行了規(guī)范與要求,PCR實(shí)驗(yàn)室各區(qū)域并沒(méi)有凈化控制要求,但為了避免交叉感染,通常采用全送全排的直流空調(diào)系統(tǒng),并且需要嚴(yán)格控制好送風(fēng)、排風(fēng)的比例,保證各實(shí)驗(yàn)區(qū)域的壓力梯度。
組合型PCR實(shí)驗(yàn)室的空調(diào)負(fù)荷、換氣次數(shù)等要求與二級(jí)生物實(shí)驗(yàn)室原則一致。PCR實(shí)驗(yàn)室的暖通空調(diào)系統(tǒng)需設(shè)置獨(dú)立的一套全新風(fēng)空調(diào)系統(tǒng),PCR實(shí)驗(yàn)室并無(wú)空氣凈化的強(qiáng)制性要求,因此只需要設(shè)置初效加中效過(guò)濾器即可,不同房間的排風(fēng)宜設(shè)置止回裝置,排風(fēng)機(jī)吸入側(cè)設(shè)置活性炭等生物凈化裝置。
組合型 PCR 實(shí)驗(yàn)室應(yīng)設(shè)置緩沖間,緩沖間在實(shí)驗(yàn)區(qū)與走廊區(qū)域形成一道雙向保護(hù)屏障,既阻止外部環(huán)境的潛在污染物質(zhì)如氣溶膠等進(jìn)入實(shí)驗(yàn)區(qū),同時(shí)又控制實(shí)驗(yàn)(產(chǎn)物分析)的有害物質(zhì)滲入環(huán)境,對(duì)實(shí)驗(yàn)區(qū)外部環(huán)境及內(nèi)部試劑均起到了保護(hù)作用。
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