對(duì)蛋白質(zhì)藥物中含有的游離巰基，可用呈一定反應(yīng)活性的聚乙二醇衍生物，如聚乙二醇–馬來(lái)酰亞胺（PEG-MAL）對(duì)其進(jìn)行定點(diǎn)修飾，得到預(yù)期產(chǎn)物。對(duì)巰基進(jìn)行聚乙二醇化的試劑還有PEG-OPSS，聚乙二醇–乙烯基砜（PEG-VS）等，此外，還有新近研究的聚乙二醇–硒（PEG-Se）試劑和聚乙二醇–多巴醌（PEG-DAQ）。

1.1 聚乙二醇–馬來(lái)酰亞胺修飾巰基

人血漿白蛋白（HSA）是一種含 585 個(gè)氨基酸殘基的單鏈無(wú)糖基化蛋白質(zhì)，是人血漿中zui豐富的蛋白質(zhì)，約占血漿總蛋白的 60%，在人體內(nèi)具有維持血容量和血液膠體滲透壓等重要physiological function，是臨床上常用的一種天然血液制品，主要用于治療失血、燒傷及創(chuàng)傷等引起的休克、腦水腫、大腦損傷所致的顱內(nèi)壓升高，以及低蛋白血癥和肝硬化或nephropathy引起的水腫和腹水。但燒傷、感染或手術(shù)等某些病理?xiàng)l件下，毛細(xì)血管通透性增加，導(dǎo)致 HSA 向血管外泄漏，且從血管滲出的 HSA 常在敏感組織聚集，從而加重或引起組織水腫。另外，HSA 適應(yīng)癥廣泛，且用量大（每個(gè)患者每天 HSA 用量達(dá)幾克），擁有巨大的市場(chǎng)需求量。但近年來(lái)，由于血液來(lái)源緊張等原因致使 HSA 供應(yīng)十分緊張，如何解決當(dāng)前白蛋白緊缺的問(wèn)題成為目前白蛋白研究的熱點(diǎn)。

對(duì)蛋白質(zhì)藥物中含有的游離巰基可用呈一定反應(yīng)活性的聚乙二醇衍生物，如聚乙二醇–馬來(lái)酰亞胺（PEG-MAL）對(duì)其進(jìn)行定點(diǎn)修飾，得到預(yù)期產(chǎn)物，見(jiàn)圖 1。針對(duì)以上*來(lái)源短缺及在某些病理?xiàng)l件下大量輸注血管保留率低，易引起或加重組織水腫的問(wèn)題，采用線性或支鏈型的馬來(lái)酰亞胺活化的 PEG 20000 共價(jià)連接到白蛋白分子上游離半*（Cys-34）位點(diǎn)上，制成 PEG 修飾的 HSA 樣品，增大白蛋白的相對(duì)分子質(zhì)量，賦予白蛋白分子較大的水化體積，從而減少 HSA 分子透過(guò)血管內(nèi)皮細(xì)胞間隙進(jìn)入周圍組織，提高 HSA 的血管保留率，減少其引起組織水腫的副反應(yīng)。PEG-HSA的CD 光譜與 HSA 的極為相似，二者的二級(jí)結(jié)構(gòu)基本相同，提示定點(diǎn) PEG 修飾并未影響 HSA 的二級(jí)結(jié)構(gòu)。小鼠體內(nèi)的藥動(dòng)學(xué)研究結(jié)果顯示 PEG-HSA 的血漿半衰期延長(zhǎng)為原來(lái)的 2.2 倍，同時(shí)總體清除率和穩(wěn)態(tài)分布體積有所降低。在急性肺損傷實(shí)驗(yàn)中測(cè)得每克肺組織中透過(guò)血管的白蛋白為（0.057±0.017）mmol，而 PEG-HSA 的透過(guò)量?jī)H為（0.034±0.007）mmol，兩者比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），提示聚乙二醇修飾的人血清白蛋白能改善人血清白蛋白的藥動(dòng)學(xué)性質(zhì)，延長(zhǎng)人血清白蛋白的體內(nèi)半衰期，聚乙二醇的高黏性和高滲性分別有助于増加微血管的灌注和減輕肺部缺血再灌注損傷，在血管透過(guò)率增加的炎癥條件下能顯著提高白蛋白的血管保留率，有助于白蛋白發(fā)揮其擴(kuò)充血容量的藥理作用，有望成為一種優(yōu)良的血容量擴(kuò)充藥。

1.2 聚乙二醇–硒試劑修飾巰基

Kunsj 等報(bào)道了一種可以選擇性修飾自由巰基的聚乙二醇化試劑，由線性聚乙二醇-N-羥基琥珀酰亞胺（PEG-NHS）和硒基半胱胺連接生成， PEG-Se 試劑的合成路線見(jiàn)圖 2。該反應(yīng)速度很快，轉(zhuǎn)換率可達(dá) 95%。這種新的 PEG-Se 試劑的活性基團(tuán)是二硒鍵，通過(guò)巰基/二硒鍵交換和巰基反應(yīng)。以18位含有未成對(duì)半*的重組人粒細(xì)胞集落刺激因子（Cys18-rhG-CSF）為模型蛋白，用 PEG-Se 試劑和商品化的 PEG 化試劑（PEG-MAL、PEG-OPSS）做聚乙二醇化對(duì)比實(shí)驗(yàn)，發(fā)現(xiàn)聚乙二醇化產(chǎn)率zui高的是 PEG-MAL，其次是 PEG-OPSS 和 PEG-Se； PEG-MAL 和PEG-Se 的反應(yīng)速度相當(dāng)，而 PEG-OPSS的反應(yīng)速度很慢。將 PEG-rhG-CSF 結(jié)合物純化后做了表征和比較，盡管所有的結(jié)合物都含有連在 Cys18 上的 PEG 20000，但活性、穩(wěn)定性及體內(nèi)表現(xiàn)都各不相同。用 PEG-MAL 生成的結(jié)合物有微小的構(gòu)象變化，這些變化也反映在低體外活性和馬來(lái)酰亞胺結(jié)合物的聚集態(tài)上。PEG-Se 試劑制備的結(jié)合物體外活性zui高，而 PEG-OPSS 試劑制備的結(jié)合物體內(nèi)表現(xiàn)Best。

1.3 聚乙二醇–多巴醌試劑修飾巰基

Xu 等描述了一種基于兒茶酚衍生的反應(yīng)性醌的巰基上進(jìn)行聚乙二醇定點(diǎn)修飾的方法。兒茶酚衍生的聚乙二醇由線性聚乙二醇琥珀酰亞胺（PEG-NHS）和多巴胺偶聯(lián)后氧化得到聚乙二醇多巴醌（PEG-DAQ），PEG-DAQ 用于修飾兩種模型蛋白，即截短鞭毛蛋白（CBLB502）和人重組睫狀節(jié)神經(jīng)細(xì)胞營(yíng)養(yǎng)因子（rhCNTF）上的半*，證實(shí)了它的巰基特異性，在中性 pH 值條件下，PEG-DAQ-rhCNTF 的收率為 87.5%，而 PEG-MAL 和PEG-VS 的收率分別為 92.3%、17.6%，在含水溶劑中孵育 96 h 后，PEG-DAQ 保留了大約 95%的反應(yīng)活性，說(shuō)明試劑在水中穩(wěn)定性好，而且聚乙二醇化反應(yīng)必須用過(guò)量的半*來(lái)淬滅才能得到更多穩(wěn)定的結(jié)合物，所得到的 PEG-DAQ-rhCNTF 在存放14d后保持了 93.5%的活性，而 PEG-MAL-rhCNTF只有 71.2%。這些結(jié)果表明，PEG-多巴醌具有高度選擇性和半*巰基反應(yīng)性，試劑本身和偶聯(lián)產(chǎn)物穩(wěn)定性好，是巰基選擇性修飾的良好試劑。