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抗體制備三個階段工藝
2022-8-22 閱讀(2054)
抗體是哺乳動物適應(yīng)性免疫系統(tǒng)對抗病原體的核心，它是在病原體刺激下由漿細胞（效應(yīng)B細胞）所分泌的一種免疫球蛋白，能夠識別并結(jié)合特異的病原體抗原，隨后通過介導(dǎo)中和作用、調(diào)理作用、效應(yīng)T細胞殺傷等來清除病原體。隨著抗體制備與改造技術(shù)的飛速發(fā)展，抗體已經(jīng)廣泛應(yīng)用于生命科學(xué)各個領(lǐng)域，包括科學(xué)研究、診斷、治療等。
抗體的制備歷史和工藝決定了抗體的質(zhì)量和類型?？贵w制備工藝可分為三個階段：傳統(tǒng)方法免疫動物獲得抗體、應(yīng)用雜交瘤技術(shù)制備抗體和基因工程技術(shù)制備抗體。
1、傳統(tǒng)方法免疫動物制備抗體：
將通過各種方法獲得的免疫原（抗原）注射至動物（比如大鼠、小鼠和兔等）體內(nèi)，刺激動物體內(nèi)B細胞分化成熟，產(chǎn)生、分泌抗體，再通過收集動物血清，分離純化而獲得成品抗體。由于早期免疫原制備、純化技術(shù)和成本限制，早期通過傳統(tǒng)方法制備的抗體多為多克隆抗體。此種方法成本相對較低，但需要使用大量動物，容易導(dǎo)致“虐dai動物"，甚至?xí)驗榕癲ai動物而遭天價罰款，并禁止多克隆抗體銷售。
2、應(yīng)用雜交瘤技術(shù)制備抗體：
1975年英國科學(xué)家Milstein和法國科學(xué)家Kohler將鼠源的B淋巴細胞同腫瘤細胞融合形成雜交瘤細胞，雜交瘤細胞即具有B細胞的抗體、分泌功能，又具有腫瘤細胞的無限增殖功能。工藝上，首先采用皮下注射、腹腔注射和血管內(nèi)注射等方式向動物體內(nèi)注射免疫原，刺激動物產(chǎn)生特定的B細胞；然后處死動物，收集脾臟B細胞；體外融合B細胞和腫瘤細胞制備雜交瘤細胞，體外篩選、培養(yǎng)雜交瘤細胞；通過體外擴增雜交瘤細胞收集、純化培養(yǎng)基上清獲得抗體，或者在動物體內(nèi)（血管內(nèi)、腹腔等）注射雜交瘤細胞、收集和純化動物體液（腹水、血清等）獲得抗體。雜交瘤技術(shù)誕生了第一代單克隆抗體，這種抗體特異性高，易于大量。
3、基因工程技術(shù)制備抗體：
基因功能技術(shù)使得研究者能在體外重組——將任一基因片段插入到特定表達載體（質(zhì)粒），通過將編輯好的質(zhì)粒轉(zhuǎn)入特定的細胞系和細胞系的體外擴增、培養(yǎng)，獲得基因片段在體外的轉(zhuǎn)錄、翻譯，從而制備抗體?；蚬こ碳夹g(shù)使得抗體的更加快速，并使得人源化抗體更為便捷，進而成為臨床應(yīng)用的抗體藥物，用于臨床治療。這一技術(shù)產(chǎn)生的抗體是特異性ji高的均一抗體，易于工業(yè)化大量。近幾年，Abcam公司推出的重組單抗即為此類技術(shù)產(chǎn)生的抗體，特異性高，親和力強。
