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上海邦景實(shí)業(yè)有限公司
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講述一些ELISA實(shí)驗(yàn)中的小技巧
2022-10-24 閱讀(146)
ELISA是酶聯(lián)接免疫吸附劑測(cè)定( Enzyme-Linked Immunosorbnent Assay )的簡(jiǎn)稱。它是繼免疫熒光和放射免疫技術(shù)之后發(fā)展起來(lái)的一種免疫酶技術(shù)。ELISA檢測(cè)原理：免疫分析是一種利用特定抗體與抗原或半抗原發(fā)生的高選擇性高特異性識(shí)別和結(jié)合原理，對(duì)待測(cè)抗體或者抗原進(jìn)行分析測(cè)定的方法，酶聯(lián)免疫吸附分析（下稱ELISA）是免疫分析的一種，分三個(gè)部分組成：免疫識(shí)別，信號(hào)輸出和數(shù)據(jù)處理。下面講述一些ELISA實(shí)驗(yàn)中的小技巧：
1.操作前應(yīng)對(duì)實(shí)驗(yàn)的物理參數(shù)有充分的了解，如環(huán)境溫度(保持在18C～25℃)、反應(yīng)孵育溫度和孵育時(shí)間、洗滌的次數(shù)等，要先查看水育箱溫度，ELISA試劑盒是否符合要求。
2.正確使用加樣器加樣器應(yīng)垂直加入標(biāo)本或試劑，避免刮擦包被板底部。加樣過(guò)程中避免液體外濺，血清殘留在反應(yīng)孔壁上，加樣器吸頭要清洗干凈，避免污染，加樣次序要與說(shuō)明書一致，否則可導(dǎo)致結(jié)果錯(cuò)誤，實(shí)驗(yàn)重復(fù)性差。
3.手工洗板加洗液時(shí)沖擊力不要太大，洗滌次數(shù)不要超過(guò)說(shuō)明書推薦的洗滌次數(shù)，洗液在反應(yīng)孑L內(nèi)滯留的時(shí)間不宜太長(zhǎng)。不要使洗液在孑L間竄流，造成孔問(wèn)污染，導(dǎo)致假陰性或假陽(yáng)性。
4.要保證加液量一致ELISA試劑盒我們?cè)谑褂脮r(shí)感覺滴瓶加液不如加樣器好，滴瓶不易控制加液量不準(zhǔn)，造成顯色不統(tǒng)一，判斷錯(cuò)誤。
5.顯色液量不可過(guò)多加樣的工作環(huán)境不能處于陽(yáng)光直射的環(huán)境下，加顯色系統(tǒng)后要避光反應(yīng)，顯色液量不能過(guò)多，以免顯色過(guò)強(qiáng)。
ELISA試劑盒的影響因素應(yīng)選用有國(guó)家批準(zhǔn)文號(hào)，質(zhì)量靠得住的產(chǎn)品，不能圖便宜，忽視質(zhì)量保證。試劑應(yīng)妥善保存于4℃冰箱內(nèi)，在使用時(shí)先平衡至室溫，不同批號(hào)的試劑組分不宜交叉使用。試劑開啟后要在一周內(nèi)用完，剩余的試劑下次用時(shí)應(yīng)先檢查是否變質(zhì)，顯色劑如被污染變色將造成全部顯色，導(dǎo)致錯(cuò)誤結(jié)果。
