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上海邦景實(shí)業(yè)有限公司
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ATCC細(xì)胞標(biāo)本的稀釋原則
2018-3-16 閱讀(202)
ATCC細(xì)胞標(biāo)本的稀釋原則：
首先通過(guò)文獻(xiàn)檢索的方式了解待測(cè)樣本的大致含量，確定適當(dāng)?shù)南♂尡稊?shù)。只有稀釋至標(biāo)準(zhǔn)曲線的范圍內(nèi)，檢測(cè)的結(jié)果才是準(zhǔn)確的。稀釋的過(guò)程中，應(yīng)做好詳細(xì)的記錄。zui后計(jì)算濃度時(shí)，稀釋了“N”倍，標(biāo)本的濃度應(yīng)再乘以“N”。
標(biāo)準(zhǔn)品的稀釋原則：2瓶，每瓶臨用前以樣品稀釋液稀釋至1ml，蓋好后靜置10分鐘以上，然后反復(fù)顛倒/搓動(dòng)以助溶解，其濃度為300 pg/ml，做系列倍比稀釋后，分別稀釋300 pg/ml，150 pg/ml，75 pg/ml，37.5 pg/ml，18.5 pg/ml，9 pg/ml，4.5 pg/ml，樣品稀釋液直接作為標(biāo)準(zhǔn)濃度0 pg/ml，臨用前15分鐘內(nèi)配制。
如配制150 pg/ml標(biāo)準(zhǔn)品：取0.5ml(不要少于0.5ml)300 pg/ml的上述標(biāo)準(zhǔn)品加入含0.5ml樣品稀釋液的Eppendorf管中，混勻即可，其余濃度以此類推。
操作流程：
實(shí)驗(yàn)開(kāi)始前，請(qǐng)?zhí)崆芭渲煤盟性噭?，試劑或樣品稀釋時(shí)，均需混勻，混勻時(shí)盡量避免起泡。每次檢測(cè)都應(yīng)該做標(biāo)準(zhǔn)曲線。如樣品濃度過(guò)高時(shí)，用樣品稀釋液進(jìn)行稀釋，以使樣品符合試劑盒的檢測(cè)范圍。
1.加樣：分別設(shè)空白孔、標(biāo)準(zhǔn)孔、待測(cè)樣品孔。空白孔加樣品稀釋液100μl，余孔分別加標(biāo)準(zhǔn)品或待測(cè)樣品100μl，注意不要有氣泡，加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動(dòng)混勻，酶標(biāo)板加上蓋或覆膜，37℃反應(yīng)120分鐘。
為保證實(shí)驗(yàn)結(jié)果有效性，每次實(shí)驗(yàn)請(qǐng)使用新的標(biāo)準(zhǔn)品溶液。
2.棄去液體，甩干，不用洗滌。每孔加標(biāo)記抗體工作液 100μl(取1μl標(biāo)記抗體加99μl標(biāo)記抗體稀釋液的比例配制，輕輕混勻，在使用前一小時(shí)內(nèi)配制)，37℃,60分鐘。
3.溫育60分鐘后，棄去孔內(nèi)液體，甩干，洗板3次，每次浸泡1-2分鐘，350μl/每孔，甩干。
4.每孔加辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記親和素工作液(同標(biāo)記抗體工作液) 100μl，37℃，60分鐘。
5.溫育60分鐘后，棄去孔內(nèi)液體，甩干，洗板5次，每次浸泡1-2分鐘，350μl/每孔，甩干。
6.依序每孔加底物溶液90μl，37℃避光顯色(30分鐘內(nèi)，此時(shí)肉眼可見(jiàn)標(biāo)準(zhǔn)品的前3-4孔有明顯的梯度藍(lán)色，后3-4孔梯度不明顯，即可終止)。
7.依序每孔加終止溶液50μl，終止反應(yīng)(此時(shí)藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色)。終止液的加入順序應(yīng)盡量與底物液的加入順序相同。為了保證實(shí)驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性，底物反應(yīng)時(shí)間到后應(yīng)盡快加入終止液。
8.用酶聯(lián)儀在450nm波長(zhǎng)依序測(cè)量各孔的光密度(OD值)。 在加終止液后15分鐘以內(nèi)進(jìn)行檢測(cè)。
ATCC細(xì)胞HAMSC 人羊膜間充質(zhì)基質(zhì)細(xì)胞 5 x 10^5 cells/vial
HCMSC 人絨毛膜間充質(zhì)基質(zhì)細(xì)胞 5 x 10^5 cells/vial
HMSC-bm 人骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞 5 x 10^5 cells/vial
HMSC-ad 人脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞 5 x 10^5 cells/vial
HMSC-hp 人肝臟間充質(zhì)干細(xì)胞 5 x 10^5 cells/vial
HUMSC 人臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞 5 x 10^5 cells/vial
HPMSC 人肺間充質(zhì)干細(xì)胞 5 x 10^5 cells/vial
HVMSC 人脊柱間充質(zhì)干細(xì)胞 5 x 10^5 cells/vial
HMMEC 人微血管內(nèi)皮細(xì)胞 5 x 10^5 cells/vial
HMEpiC 人上皮細(xì)胞 5 x 10^5 cells/vial
HMF 人成纖維細(xì)胞 5 x 10^5 cells/vial
HUVEC 人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞 5 x 10^5 cells/vial
HUAEC 人臍動(dòng)脈內(nèi)皮細(xì)胞 5 x 10^5 cells/vial
HUVSMC 人臍靜脈平滑肌細(xì)胞 5 x 10^5 cells/vial
HUASMC 人臍動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞 5 x 10^5 cells/vial
RPC 大鼠垂體細(xì)胞 5 x 10^5 cells/vial
RMC 大鼠腦膜細(xì)胞 5 x 10^5 cells/vial
RN-r 大鼠腦脊神經(jīng)元 1 x 10^6 cells/vial
RN-c 大鼠皮質(zhì)神經(jīng)元 1 x 10^6 cells/vial
RGC 大鼠顆粒細(xì)胞 1 x 10^6 cells/vial
RN-h 大鼠海馬神經(jīng)元 1 x 10^6 cells/vial
RN-sn 大鼠黑質(zhì)神經(jīng)元 1 x 10^6 cells/vial
RN-s 大鼠紋狀體神經(jīng)元 1 x 10^6 cells/vial
RN-vsc 大鼠腹脊髓神經(jīng)元 1 x 10^6 cells/vial
RN-dsc 大鼠背脊髓神經(jīng)元 1 x 10^6 cells/vial
ROPC 大鼠少突膠質(zhì)前體細(xì)胞 5 x 10^5 cells/vial
RSC 大鼠雪旺細(xì)胞 5 x 10^5 cells/vial
RPNF 大鼠周神經(jīng)成纖維細(xì)胞 5 x 10^5 cells/vial
RA 大鼠星形膠質(zhì)細(xì)胞 5 x 10^5 cells/vial
RA-c 大鼠小腦星形膠質(zhì)細(xì)胞 5 x 10^5 cells/vial
RA-h 大鼠海馬趾星形膠質(zhì)細(xì)胞 5 x 10^5 cells/vial
RM 大鼠小膠質(zhì)細(xì)胞 5 x 10^5 cells/vial
RLF 大鼠淋巴成纖維細(xì)胞 5 x 10^5 cells/vialATCC細(xì)胞
