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ATCC細胞實驗時常遇到的問題分析
2018-3-21 閱讀(385)
ATCC細胞實驗時常遇到的問題分析
1 試劑空白
試劑空白吸光度是反映試劑質(zhì)量的指標之一。每種試劑都有一定的空白吸光度范圍，試劑空白吸光度的改變往往提示該試劑的變質(zhì)；如利用Trinder反應(yīng)為原理的檢測試劑會因含酚類物質(zhì)被氧化為醌而變?yōu)榧t色。堿性磷酸酶、r一谷氨酰轉(zhuǎn)肽酶、等檢測試劑會因基質(zhì)分解出硝基酚或酚基苯胺而變黃。有些試劑久置后變渾濁。這些情況均可使空白吸光度升高。氨基轉(zhuǎn)移酶、天冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶等負反應(yīng)，在放置過程中其試劑空白吸光度會因NADH自行氧化為NAD+而下降。原則上，吸光度上升的反應(yīng)，其試劑空白吸光度越低越好，不能超過一個高限；相反，吸光度下降的反應(yīng)，其試劑空白吸光度不能低于一個低限。因此，試劑空白吸光度限值，常作為程序參數(shù)輸入儀器，如經(jīng)核查超限，儀器會自動報警，提示更換試劑。需要指出的是，還原型輔酶I（或II）等投料量不足或劣質(zhì)的原料，往往需要加大用量，才使“表觀”吸光度上升，湊合過試劑空白核對的“關(guān)”，其后果為如下情況：
1．1 線性范圍變窄 現(xiàn)象：高值測不高。原因：試劑時有效成分投料量不足；試劑成份穩(wěn)定性較差。
1．2 靈敏度變低現(xiàn)象：酶促反應(yīng)速度曲線斜率下降，測定結(jié)果有嚴重系統(tǒng)誤差。原因：試劑底物濃度不足。
1．3 低值偏高 現(xiàn)象：試劑空白的變化曲線（吸光度VS時間）明顯波動。原因：試劑自身不穩(wěn)定，自行分解；工具酶純度不夠，雜酶含量超限，導致干擾作用。
2 樣品信息
樣品的溶血、脂血、黃疸等會對測定結(jié)果產(chǎn)生非化學反應(yīng)的干擾。因此，應(yīng)根據(jù)溶血、脂濁、黃疸的光譜吸收特性，采用雙波長或多波長的檢測模式，并在結(jié)果計算中扣除因溶血、脂血、黃疸引起的影響，減少干擾程度。
3 elisa試劑盒測定范圍
每種待測物都有一個可測定的濃度或活性范圍，樣品結(jié)果若超過此范圍，分析儀將顯示結(jié)果超過范圍的提示。表示試劑已經(jīng)變質(zhì)，應(yīng)更換合格試劑。
4 底物耗盡
使用連續(xù)監(jiān)測法、兩點法測定酶活性時，若酶活性非常高，底物接近被耗盡，吸光度上升或下降會超過某一吸光度變化范圍，監(jiān)測期的吸光度將偏離線性，使測定結(jié)果不可靠。
5 酶的預(yù)活化
測定血清中的某些酶，如CK，離體（采血）后很容易失活。失活的原因是酶活性中心的活性基因巰基（一SH）被氧化造成的。只有通過適當?shù)倪€原作用才能重新激活。如CK—NAC試劑盒即含有CK活化劑，名為N一乙酰半。實驗研究證明，NAC對血清中已失活的CK活化過程約需180 S。這就是CK測定為什么要延遲時間較長的理論依據(jù)。在AST，ALT采用IFCC方法測定時需要磷酸吡哆醛預(yù)活化。需要強調(diào)：含有活化劑的生化試劑，其測定酶活性的結(jié)果要高些。
6 校準與結(jié)果溯源性
酶的校正：要滿足在同一方法學、同一測定條件、與理論計算的FACTOR值差異不大，沒有發(fā)現(xiàn)有明顯影響因素，方可進行校正。
ATCC細胞HOPC-os cDNA 人少突膠質(zhì)前體細胞(懸浮生長)cDNA 20 reactions
HSC cDNA 人雪旺細胞cDNA 20 reactions
HPC cDNA 人神經(jīng)束膜細胞cDNA 20 reactions
HA cDNA 人星形膠質(zhì)細胞cDNA 20 reactions
HA-c cDNA 人小腦星形膠質(zhì)細胞cDNA 20 reactions
HA-sp cDNA 人脊髓星形膠質(zhì)細胞cDNA 20 reactions
HA-h cDNA 人海馬趾星形膠質(zhì)細胞cDNA 20 reactions
HM cDNA 人小膠質(zhì)細胞cDNA 20 reactions
HDMEC cDNA 人微血管內(nèi)皮細胞cDNA 20 reactions
HDLEC cDNA 人血管平滑肌細胞cDNA 20 reactions
HEK cDNA 人表皮角質(zhì)細胞cDNA 20 reactions
HEK-a cDNA 人表皮角質(zhì)細胞-成人cDNA 20 reactions
HEM-l cDNA 人表皮黑色素細胞-淺色素cDNA 20 reactions
HEM-m cDNA 人表皮黑色素細胞-中色素cDNA 20 reactions
HEM-d cDNA 人表皮黑色素細胞-深色素cDNA 20 reactions
HDF-f cDNA 人成纖維細胞-胎兒cDNA 20 reactions
HDF-n cDNA 人成纖維細胞-新生兒cDNA 20 reactions
HDF-a cDNA 人成纖維細胞-成人cDNA 20 reactions
HHDPC cDNA 人細胞cDNA 20 reactions
HHGMC cDNA 人生發(fā)基質(zhì)細胞cDNA 20 reactions
HHORSC cDNA 人外根殼細胞cDNA 20 reactions
HHIRSC cDNA 人內(nèi)根殼細胞cDNA 20 reactions
HLEC cDNA 人淋巴內(nèi)皮細胞cDNA 20 reactions
HLF cDNA 人淋巴成纖維細胞cDNA 20 reactions
HOK cDNA 人口腔角質(zhì)細胞cDNA 20 reactions
HGF cDNA 人牙齦成纖維細胞cDNA 20 reactions
HPLF cDNA 人牙周膜成纖維細胞cDNA 20 reactions
HEEpiC cDNA 人食道上皮細胞cDNA 20 reactions
HESMC cDNA 人食道平滑肌細胞cDNA 20 reactions
HIMEC cDNA 人腸微血管內(nèi)皮細胞cDNA 20 reactions
HISMC cDNA 人腸平滑肌細胞cDNA 20 reactionsATCC細胞
