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上海邦景實(shí)業(yè)有限公司
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elisa實(shí)驗(yàn)的封閉劑如何選擇
2020-1-8 閱讀(4677)
常見的封閉劑是：BSA（牛血清白蛋白）、脫脂奶粉、酪蛋白、明膠和Tween-20(0.05 - 0.1%)稀溶液PBST或者TBST。
1、SA是常用的封閉劑，成分單一適用于大多數(shù)情況。若免疫原是偶聯(lián)BSA的， BSA有很強(qiáng)的免疫原性，會導(dǎo)致產(chǎn)生很多的針對BSA的抗體，為避免交叉反應(yīng)，不能用BSA、脫脂奶粉等封閉，可以選用酪蛋白或無蛋白的封閉劑封閉。大部分BSA中有少量的抗體殘留，會導(dǎo)致抗原/抗體之間的交叉反應(yīng)，產(chǎn)生高背景，雜帶較多或使得本底水平增高。
2、封閉血清的原理主要有兩點(diǎn)，一是待檢樣本會有些與蛋白非特異性結(jié)合的物質(zhì)，從而導(dǎo)致背景過高，因此可以用BSA或血清封閉掉這部分非特異性的結(jié)合，從這點(diǎn)看，BSA和血清沒有明顯區(qū)別。二是待檢樣本中可能會有Fc受體，可以和抗體恒定區(qū)結(jié)合，與抗體特異性無關(guān)，封閉血清中有抗體，因此用血清可以封閉掉一抗及二抗和樣本Fc受體之間結(jié)合。BSA則無法封閉Fc受體。
3.脫脂奶粉的優(yōu)點(diǎn)是價(jià)錢便宜，但是由于成分相對復(fù)雜，所以適用范圍要狹窄一些。磷酸化抗體也許會導(dǎo)致背景增加，此外，因?yàn)樽陨砗?不能用于標(biāo)記的抗體系統(tǒng)。
4、酪蛋白 和BSA作用類似，普通酪蛋白不易溶解。中性和堿性條件下帶有負(fù)電性，與同樣帶負(fù)電荷膠體金之間存在排斥力，而膜一般都是帶正電荷，會與酪蛋白有一定的吸附作用，用酪蛋白封閉效果好些。
5、無蛋白化合物 甲醛：與PVDF膜表面的微結(jié)構(gòu)反應(yīng)或者結(jié)合，使之失去結(jié)合蛋白的疏水力或者空間結(jié)構(gòu)域。去污劑(吐溫-20)：Tween-20是一種非離子型去污劑，有復(fù)性抗原的作用，與膜疏水性吸附，有很強(qiáng)的對非特異性吸附的洗脫作用，同樣可以降低蛋白間的疏水作用，可提高特異性的識別能力。
