 |
上海邦景實業(yè)有限公司
主營產(chǎn)品： 進口elisa試劑盒，細胞株，細胞系，菌種 |
聯(lián)系電話
15000017673
公司信息
- 聯(lián)系人：
- 劉小姐
- 電話：
- 021-52960952
- 手機：
- 15000017673
- 售后電話：
- 15000017673
- 傳真：
- 021-57690166
- 地址：
- 上海市閔行區(qū)碧泉路36弄銀宵大廈
- 郵編：
- 200000
- 網(wǎng)址：
- www.bhsy-e.com/
細胞培養(yǎng)的步驟
2020-5-25 閱讀(1325)
一、 復蘇
1. 把凍存管從液氮中取出來，立即投入37℃水浴鍋中，輕微搖動。液體都融化后（大概1-1.5分鐘），拿出來噴點酒精放到超凈工作臺里。
2. 把上述細胞懸液吸到裝10ml培養(yǎng)基的15ml的離心管中（用培養(yǎng)基把凍存管洗一遍，把粘在壁上的細胞都洗下來），1000轉(zhuǎn)離心5分鐘。
3. 把上清液倒掉，加1ml培養(yǎng)基把細胞懸浮起來。吸到裝有10ml培養(yǎng)基的10cm培養(yǎng)皿中前后左右輕輕搖動，使培養(yǎng)皿中的細胞均勻分布。
4. 標好細胞種類和日期、培養(yǎng)人名字等，放到CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，細胞貼壁后換培養(yǎng)基。
5. 3天換一次培養(yǎng)基。
二、 傳代
1. 培養(yǎng)皿中的細胞覆蓋率達到80%-90%時要傳代。
2. 把原有培養(yǎng)基吸掉。
3. 加適當?shù)模芨采w細胞就行），消化1-2分鐘。
4. 細胞都變圓后加如入等體積的含血清的培養(yǎng)基終止消化。
5. 用移液槍吹打細胞，把細胞都懸浮起來。
6. 把細胞吸到15ml的離心管中，1000轉(zhuǎn)離心5分鐘。
7. 倒掉上清液，加1-2ml培養(yǎng)基，把細胞都吹起來。
8. 根據(jù)細胞種類把細胞傳到幾個培養(yǎng)皿中。一般，癌細胞分5個，正常細胞傳3個。繼續(xù)培養(yǎng)。
三、 凍存
把細胞消化下來并離心（同上）。用配好的凍存液把細胞懸浮起來，分裝到滅菌的凍存管中，靜止幾分鐘，寫明細胞種類，凍存日期。4℃ 30min，-20℃ 30min，-80℃過夜，然后放到液氮灌中保存。
凍存液的配制： 70%的*培養(yǎng)基+20%FBS+10%DMSO. DMSO要慢慢滴加，邊滴邊搖。
